Profesorul tău îți dă un eșantion de bacterii și te întreabă: Câte microorganisme viabile sunt în acest eșantion? Ce înseamnă acest lucru și cum vă dați seama? O metodă este găsirea numărului de unități care formează colonii(CFU).
Ce sunt CFU?
CFU se referă la numărul de colonii individuale ale oricărui microorganism care cresc pe o placă de medii. La rândul său, această valoare reprezintă numărul de bacterii capabile să se replice, deoarece au format colonii pe placă. Există o formulă CFU care implică eșantionarea.
Cum găsiți CFU?
Numărarea numărului de bacterii dintr-o probă lichidă este foarte dificilă. Sunt prea mulți și sunt prea mici. Mai mult, unii dintre ei pot fi morți și alții în viață, iar cei morți nu ar trebui să ia în considerare totalul. Te interesează doar viabil bacterii sau bacterii care se pot replica. Deci, cum îți poți da seama câte bacterii ai?
În același mod în care puteți participa la un sondaj de 1.000 de persoane și îl puteți aplica la 10.000 de persoane pentru a afla cum s-ar putea gândi la un anumit subiect. Puteți încerca să luați o mică parte din eșantionul original, aflați în câte bacterii există acea parte și apoi calculați pentru a aproxima câte ar fi putut fi în original probă.
Utilizarea diluțiilor pentru a găsi CFU
Procedura pentru găsirea CFU a unei probe date implică mai întâi diluarea probei respective. Diluțiile sunt apoi placate pe plăci cu mediul de creștere corect. Diluările multiple sunt adesea o idee bună, deoarece proba originală poate fi foarte concentrată.
După ce ați permis bacteriei să crească pe plăci pentru o anumită perioadă de timp, colonii individuale sunt numărate pe o farfurie. Dacă eșantionul a fost prea concentrat, atunci în loc de colonii individuale, veți vedea o zonă mare acoperită de creștere bacteriană, numită a gazon. Aceasta înseamnă că ar trebui să vă diluați în continuare eșantionul și să încercați să creșteți din nou, astfel încât să puteți vedea colonii individuale.
Deoarece coloniile individuale provin dintr-o singură bacterie care s-a reprodus de mai multe ori, numai acestea sunt considerate în CFU.
Procedură experimentală pentru găsirea CFU
Un exemplu de utilizare a diluțiilor pentru a face un calcul CFU ar putea fi următorul: Mai întâi, din eșantionul inițial pe care ți-l dă profesorul tău, iei 1 ml și îl placi. A doua zi vezi că există o peluză de bacterii. Aceasta înseamnă că nu puteți număra numărul de CFU. Următorul pas este realizarea unor diluții.
Mai întâi, luați 1 ml de probă și o diluați în 9 ml de mediu lichid. Deoarece diluția este o probă dintr-o parte până la nouă părți de diluant, se numește diluție 1:10. Apoi, luați 1 ml de diluție 1:10 și adăugați acest lucru la 9 ml de mediu lichid. Această diluție este o diluție de 1: 100. În cele din urmă, faceți o diluție de 1: 1.000 luând 1 ml din diluția 1: 100 și adăugând 9 ml de mediu lichid. Pentru fiecare diluare, aveți acum 10 ml de cultură bacteriană diluată.
Diluțiile făcute, puneți 0,5 ml din diluții pe plăci. Asigurați-vă că etichetați plăcile cu care s-a placat diluția.
A doua zi te întorci și vezi că toate plăcile au câteva colonii individuale pe ele. Vrei să alegi o farfurie între 30 și 300 de colonii. Vedeți că placa de diluție 1: 1.000 are aproximativ 10 colonii, ceea ce înseamnă că ați diluat prea mult proba. Placa respectivă nu va fi utilă în găsirea CFU.
Placa de diluție 1:10 are multe colonii, poate mai mult de 300. În acest caz, puteți merge pe placa 1: 100. Numărați coloniile de pe această placă și descoperiți că are 179 de colonii. Aceasta înseamnă că 0,5 ml din diluția 1: 100 conține 179 CFU. Dar cum rămâne cu eșantionul original?
Ce este calculul CFU?
Acum că aveți câteva date, puteți face calculul CFU în eșantionul original.
1. Luați cantitatea pe care ați placat-o (0,5 ml) și înmulțiți-o cu factorul de diluare (0,01) pentru a produce 0,005. Trebuie să faceți acest lucru pentru a găsi factorul de diluare care a generat numărul de CFU. Aici, o jumătate de mililitru din diluția 1: 100 v-a permis să numărați CFU.
2. Împărțiți CFU din diluarea (179) la rezultatul de la Pasul 1 (0,005) pentru a produce 35,800 CFU.
Aceasta înseamnă că 1 ml original de probă care a fost diluată conține 35.800 UFC. Un alt mod de a pune acest lucru este să spunem că proba originală are 35.800 CFU / mL.
CFU este un instrument excelent pentru a găsi câte bacterii, ciuperci sau orice microorganisme există într-o probă dată. Metoda de placare descrisă aici este deosebit de utilă pentru probe foarte concentrate sau organisme care nu cresc bine în cultura lichidă.