Bacteriile sunt cultivate în cutii Petri pe un mediu solid cunoscut sub numele de agar bacterian, unde se formează colonii circulare ridicate. Spre deosebire de o celulă bacteriană individuală, o colonie este un grup de bacterii suficient de mare pentru a fi vizibilă cu ochiul liber. Creșterea bacteriană poate fi măsurată prin simpla observare a numărului de colonii prezente; cu toate acestea, metode mai cantitative includ utilizarea unei camere de numărare sau, mai des, numărarea plăcilor viabile. Acesta din urmă este utilizat cel mai frecvent, deoarece oferă și informații calitative, cum ar fi efectul condițiilor de creștere variate. Deoarece ar putea exista miliarde de bacterii într-o cutie Petri, măsurarea necesită mai întâi diluarea probei, astfel încât să fie posibil să se numere numărul de colonii.
Într-o eprubetă, adăugați 10 microlitri din cultura bacteriană inițială la 90 microlitri de mediu de diluare. Închideți capacul tubului strâns și rotiți ușor pentru a obține un amestec omogen. Acum proba este o zecime din concentrația sa inițială.
Transferați 10 microlitri din această nouă probă într-o nouă eprubetă care conține 90 microlitri de mediu de diluare, amestecați-o din nou. Încă o dată, rezultatul va fi proba diluată în continuare - acum va fi o sutime din concentrația sa inițială. Repetați acest lucru de mai multe ori, până când proba originală a fost diluată între 104 și 1010 ori. Asigurați-vă că fiecare tub este etichetat cu diluția corectă, de exemplu 10-1, 10-2 și așa mai departe.
Distribuiți 10 microlitri din ultima diluție finalizată pe placa de agar. Folosind marginea de împrăștiere, distribuiți soluția bacteriană pe întreaga suprafață a plăcii de agar. Repetați acest lucru pentru încă două farfurii. De asemenea, este obișnuit să efectuați acești pași cu alte niveluri de diluare pentru comparație. Asigurați-vă că etichetați fundul plăcilor. Înlocuiți capacele de pe fiecare placă și lăsați plăcile de agar să se usuce timp de câteva minute, fie pe o bancă de laborator sub o flacără, fie într-un incubator. Așezați plăcile în incubator, care trebuie setate la temperatura adecvată pentru tulpina bacteriilor. Se lasă să crească timp de 12 până la 16 ore.
Coloniile ar trebui să fie vizibile după 16 ore; cu toate acestea, unele modificări genetice pot necesita mai mult timp (de exemplu, dezvoltarea culorii). Când coloniile sunt observabile, scoateți plăcile și găsiți altele care au între 30 și 300 de colonii. Folosind un marker permanent, puneți un punct pe fundul vasului Petri - partea cu agar, nu capacul - oriunde o colonie este vizibilă prin agar. Numărați fiecare punct marcator. Repetați pentru fiecare fel de mâncare.
Pentru a măsura cantitatea de bacterii din cultura inițială pentru acest experiment, diluția trebuie inversată în calcule, în două locuri. În primul rând, când ați luat un microlitru din eprubetă pentru a pune în cutia Petri, ați luat o zecime din proba diluată, deci trebuie să înmulțiți totul cu 10 pentru a inversa acest lucru. În plus, dacă factorul de diluare din eprubetă a fost, de exemplu, 10-7, atunci numărul coloniilor trebuie înmulțit cu 107 pentru a inversa efectul de diluare. Pur și simplu eliminați semnul negativ de la exponentul din calcule. Folosiți formula:
[Numărul de colonii numărate] × 10 × [de câte ori trebuie multiplicată proba pentru a ajunge la concentrația inițială: de exemplu, 105] = Numărul de unități care formează colonii (CFU) pe mililitru de cultură inițială. Aceasta este creșterea bacteriană în plăcile Petri.