Desenați o diagramă a concentrației produsului în funcție de timp pentru datele din prima eprubetă a testului enzimatic. Notă: axa orizontală ar trebui să fie „timp”, iar axa verticală ar trebui să fie „concentrarea produsului”.
Calculați linia de regresie liniară pentru punctele de date pe care le-ați trasat în secțiunea 1, pasul 1. În timp ce calculatoarele Excel și grafice pot determina cu ușurință acest model liniar, puteți obține o estimare a regresiei panta liniei prin împărțirea diferenței de concentrație a produsului între punctele de date adiacente la diferența lor de timp.
Înregistrați panta liniei de regresie liniară din secțiunea 1, pasul 2 ca „viteza de reacție inițială (Vo)”. Notă: în modelul liniei de regresie „[concentrația produsului] = m [timp] + b,„ coeficientul „m” este pantă.
Repetați pașii 1, 2 și 3 pentru restul eprubetelor din test.
Graficul invers al concentrației substratului pentru fiecare eprubetă comparativ cu inversul vitezei sale inițiale de reacție (din secțiunea 1, pasul 4). De exemplu, dacă viteza inițială pentru o eprubetă cu o concentrație inițială a substratului de 50 micromolari (uM) a fost 80 uM / s, inversele ar fi 1/50 uM pentru concentrația substratului și 1/80 uM / s pentru inițială viteză. Notă: concentrația substratului invers trebuie să fie pe axa orizontală, iar viteza inițială inversă să fie pe axa verticală.
Notă: concentrația substratului trebuie să fie pe axa orizontală, iar viteza inițială de reacție ar trebui să fie pe axa verticală.
Determinați linia de regresie liniară pentru graficul pe care l-ați trasat în Secțiunea 2, Pasul 1. Notă: pentru că va trebui să cunoașteți intersecția y pentru linia de regresie, ar trebui să introduceți punctele din Secțiunea 2, Pasul 1 fie în Excel, fie într-un calculator grafic și utilizați modelarea de regresie încorporată funcționalitate.
Împarte 1 la intersecția y de la linia de regresie liniară. Acest lucru vă va oferi valoarea inversă a Vmax, viteza maximă de reacție pentru enzimă. Notă: dacă modelul de regresie liniară ia forma "[Inversa Vo] = m [Inverse Substrat Conc.] + B", atunci valoarea lui "b" ar fi intersecția y. Împărțiți 1 cu „b” pentru a calcula inversul lui Vmax.
Împarte 1 la rezultatul din Secțiunea 2, Pasul 3 pentru a calcula valoarea reală a Vmax.
Determinați concentrația enzimei în testul original (a se vedea datele brute). Notă: concentrația enzimei este aceeași pentru toate eprubetele; numai concentrațiile substratului variază în test.
Împărțiți Vmax (din secțiunea 2, pasul 4) la concentrația enzimei (din secțiunea 2, pasul 5). Rezultatul este valoarea Kcat.
Un redactor din Chicago, Andy Pasquesi are o vastă experiență în scrierea pentru automobile (BMW, MINI Cooper, Harley-Davidson), servicii financiare (Ivy Funds, William Blair, T. Rowe Price, CME Group), clienți din domeniul sănătății (Abbott) și bunurilor de larg consum (Sony, Motorola, Knoll). Este licențiat în limba engleză la Universitatea Harvard, dar nu-i pasă de virgula Oxford.