A eletroforese em gel é um método usado em laboratórios para separar DNA (ácido desoxirribonucleico). Também pode ser usado para separar RNA e proteínas.
A leitura dos resultados da eletroforese em gel permite aos pesquisadores determinar o tamanho dos fios de uma amostra. Para entender como funciona o processo, deve-se primeiro aprender a definição da eletroforese em gel.
Definição de eletroforese em gel
A eletroforese em gel é uma ferramenta poderosa usada em biologia molecular para determinar o tamanho e a carga elétrica do DNA, RNA e proteínas. Você começa usando pedaços de DNA que foram digeridos por enzimas de uma fita maior de DNA.
Usando a intensidade da banda de eletroforese em gel como seus resultados, você pode descobrir qual é o tamanho dos fragmentos. Pode-se então obter um Impressão digital de DNA.
Como a porção “eletro” da palavra revela, um definição de eletroforese em gel envolve o uso de um campo elétrico. É utilizada uma máquina especial que contém uma solução tampão que cobre os eletrodos, um poço para o gel suspender dentro e os próprios eletrodos.
O Gel em Eletroforese em Gel
Eletroforese em gel requer o uso de um gel formado em uma placa tipicamente feita de uma versão purificada de ágar de algas marinhas chamada agarose.
Géis de agarose fazer uma matriz porosa através da qual moléculas carregadas de vários tamanhos podem viajar em velocidades diferentes. Um produto químico chamado brometo de etídio (EtBr) é adicionado à solução de gel antes de despejá-lo em um molde.
Se você tiver moléculas de DNA ou proteínas muito pequenas para separar, pode ser necessário usar um gel de poliacrilamida em vez de agarose. Preste atenção ao usar poliacrilamida, pois é neurotóxico.
Um pente especial é colocado no molde de gel de agarose e cuidadosamente removido após solidificar. É aqui que o fragmento de DNA ou outras amostras moleculares são colocados, tendo primeiro sido misturados com um corante de carga especial. O carregando corante é apenas para rastrear o movimento do DNA, uma vez que não é visível de outra forma.
Há também um poço que contém o que é chamado de Escada de DNA ou marcador. Isso serve como um modelo de alta qualidade com tamanhos de banda conhecidos, para comparação de tamanho com as amostras de DNA em estudo. Uma vez que o campo elétrico é aplicado, essas moléculas carregadas negativamente viajarão através do gel em direção à extremidade positiva.
Resultados da eletroforese em gel
Uma vez que as moléculas viajaram até o final do gel, é hora de ler resultados de eletroforese em gel. O corante EtBr no gel liga-se ao DNA facilmente, daí seu uso, e então você pode ver bandas de DNA fluorescentes sob luz ultravioleta.
Você deve ter muito cuidado para não tocar no brometo de etídio, pois sua afinidade com o DNA também significa que ele pode ser desenrolado; portanto, é considerado um mutagênico. Corantes mais novos e mais seguros estão agora disponíveis, embora seus preços sejam mais altos.
A luz ultravioleta revela a intensidade da banda de eletroforese em gel do DNA ou outras amostras moleculares. A localização das bandas em um gel revela o tamanho do Fragmento de DNA. O intensidade da banda de eletroforese em gel revela a concentração da molécula.
Agora você pode comparar as bandas de DNA em suas amostras com a amostra da escada de DNA. Os tamanhos de banda conhecidos da escada o ajudarão a determinar o tamanho relativo do DNA que você está estudando.
A importância da eletroforese em gel de qualidade
A eletroforese em gel tem sido usada em Impressão digital de DNA e análise forense. Ajudou os pesquisadores a determinar informações sobre os genomas de muitas espécies. O uso de resultados de eletroforese em gel de alta qualidade é essencial para esses campos importantes.
Portanto, é fundamental trabalhar com ingredientes de alta qualidade e ter muito cuidado ao fazer géis. É essencial evitar a contaminação das amostras de DNA com RNA ou proteínas.
Certifique-se de usar tampão limpo, despeje o gel com cuidado para que os poços do pente sejam formados uniformemente e mantenha todos os reagentes na temperatura adequada. Eletroforese em gel A intensidade da banda deve ser vibrante e limpa, sem traços de outro DNA no fundo e sem manchas de RNA ou proteínas poluindo o gel.