A eletroforese em gel é um método usado em laboratórios para medir e classificar fitas de DNA. É necessário porque o DNA em condições normais é muito pequeno para ser manipulado, mesmo quando visto na maioria dos microscópios. O laboratório de eletroforese em gel usa um procedimento relativamente simples e a mesma técnica básica também pode ser usada para separar proteínas individuais.
The Gel Matrix
Para iniciar o procedimento de eletroforese em gel, primeiro você deve criar o gel. Normalmente, os géis são feitos em folhas finas usando uma substância chamada agarose. A agarose em pó é colocada em um frasco, seguida por uma solução de água salgada chamada tampão. Essa mistura de agarose e tampão é aquecida até que as duas substâncias se fundam e, em seguida, despejada em um molde de formação. Um dispositivo chamado pente é então colocado em uma extremidade do molde antes que o gel esfrie. Quando o gel é resfriado, o pente é removido, deixando pequenas fendas que serão usadas para armazenar as amostras de DNA.
Uma característica especial da mistura de agarose resfriada (chamada de matriz de gel) deriva do fato de que ela é criada com água salgada. Quando eletrificada, a matriz se tornará condutiva, permitindo que a eletricidade flua ao longo de seu comprimento. Outra propriedade especial da matriz de gel é a presença de orifícios microscópicos regulares. Esses orifícios permitirão que os filamentos de DNA percorram a matriz do gel e facilitarão o processo de classificação.
A Câmara de Eletroforese
Seu próximo passo é criar uma câmara de eletroforese. Esta é uma pequena caixa retangular, conectada com uma conexão elétrica positiva e negativa em cada extremidade. As câmaras são normalmente rasas, pequenas o suficiente para caber em uma mesa e construídas com materiais transparentes como o acrílico.
A solução de água salgada é derramada no fundo da câmara de eletroforese, e a matriz de gel é submersa ligeiramente nesta solução. A água salgada tem dois propósitos: auxiliar o fluxo de eletricidade e manter a matriz de gel úmida. Como o DNA é impulsionado por uma carga negativa, coloque sua matriz de forma que suas amostras fiquem localizadas próximas à sua conexão elétrica negativa.
Preparando o DNA
As amostras de DNA são então preparadas. Como o DNA em solução é quase impossível de ser visto, um agente corante chamado tampão de carga é adicionado a cada amostra individual. Esse agente também torna a solução de DNA mais espessa, tornando-a menos líquida e mais funcional. Usando uma pipeta, transfira uma amostra de solução de DNA para cada slot alternado na matriz de gel. No espaço vazio entre cada amostra, coloque alguma solução de DNA cujo comprimento você já conhece (chamado padrão de DNA) para controle e comparação do experimento.
Ligue a energia
Agora, ligue sua câmara de eletroforese. Sob potência negativa, suas amostras de DNA serão forçadas a cruzar o comprimento da câmara. Pequenos filamentos de DNA se moverão mais rapidamente através da matriz de gel e, em um curto período de tempo, eles se separarão dos filamentos mais longos e mais lentos. O corante no agente de coloração permite que você siga a trilha do DNA. Você não será capaz de ver fitas individuais de DNA, mas fitas do mesmo comprimento se agruparão.
Passos Finais
Quando o DNA é separado, a matriz é removida da câmara de eletroforese. O DNA é então corado para facilitar a medição e o exame.