Cientistas e técnicos geralmente precisam calcular a concentração de células em uma suspensão. Por exemplo, quando um paciente tira seu sangue em um consultório médico, o laboratório pode usar certos métodos para procurar a quantidade de glóbulos brancos em um determinado volume de sangue. Isso fornece ao médico muitas informações sobre a saúde do paciente, especialmente o sistema imunológico e se ele está lutando contra uma infecção ou outra doença. Testes como este podem procurar muitas outras células no sangue, bem como fluido espinhal e outros fluidos corporais, como contagens de células de esperma no sêmen para fins de fertilidade. Os cientistas também calculam as concentrações celulares de bactérias, leveduras e outros microorganismos para diversos fins, que vão desde pesquisas ecológicas a tecnologias industriais. Uma das técnicas mais comuns também é ensinada em muitas aulas de biologia da faculdade e usa um dispositivo chamado câmara de contagem.
Antes que a suspensão de células possa ir para a câmara de contagem, ela pode precisar de diluição porque pode conter milhares ou milhões de células. Nesse caso, as células não podem ser contadas de forma razoável. Para diluir a amostra, use uma pipeta estéril para colocar dez microlitros da solução de células em um tubo de ensaio contendo 90 microlitros de um diluente. O tipo de diluente dependerá do tipo de célula. Misture bem. Esta solução é agora dez vezes mais diluída do que a amostra inicial, então seu fator de diluição é 10
Você pode precisar tentar várias diluições para determinar o fator de diluição correto para a câmara de contagem. Uma câmara de contagem é basicamente uma caixa retangular muito pequena e transparente com uma profundidade precisa e uma grade precisa inscrita no topo. Também é conhecido como hemocitômetro ou, às vezes, hemacitômetro. O objetivo é que a suspensão seja diluída o suficiente para que, ao ser vista na câmara de contagem, nenhuma célula se sobreponha e elas sejam distribuídas por toda a grade de maneira uniforme. Pipete a suspensão diluída contendo as células para o poço da câmara de contagem, onde se depositará na câmara de grade por ação capilar. Coloque a câmara de contagem na platina do microscópio e veja-a em baixa potência.
A grade contém quadrados que são feitos de quadrados ainda menores. Selecione aproximadamente quatro ou cinco quadrados, ou quantos você precisar para contar pelo menos 100 células, em um padrão de sua escolha, como os quatro cantos e um quadrado central. Se as células forem grandes, podem ser quadrados grandes, mas se as células forem pequenas, você pode escolher os quadrados menores.
O volume específico de cada grade quadrada pode variar de acordo com o fabricante da câmara de contagem, mas, muitas vezes, a profundidade da câmara é de 0,1 milímetros, a área dos quadrados grandes é de 1 milímetro quadrado e a área dos quadrados menores é de 0,04 quadrado milímetros. Os quadrados maiores, então, têm um volume de 0,1 milímetros cúbicos. Para este exemplo, suponha que você contou um total de 103 células em cinco quadrados e que diluiu a amostra inicial até que o fator de diluição fosse 10-2.
Se cada grade quadrada tem um volume de 0,1 milímetros cúbicos e cinco foram contados, então o volume total da câmara que foi contado foi de 0,5 milímetros cúbicos, e havia 103 células. Dobrado para aumentar 1 milímetro cúbico, ficaria com 206 células. Um centímetro cúbico é equivalente a 1 mililitro, o que é uma medida útil para líquidos. Existem 1.000 milímetros cúbicos em um centímetro cúbico. Portanto, se houvesse um centímetro cúbico, ou um mililitro, de suspensão, você teria contado 206.000 (206 x 1.000) células. Isso é o que parece como uma equação:
Volume do quadrado da grade × número de quadrados contados = volume total da suspensão contada
Número de células ÷ volume da suspensão contada = contagem de células por milímetros ao cubo
Contagem de células por milímetros ao cubo × 1000 = contagem de células por mililitro
Você precisará levar em conta qualquer diluição realizada para tornar a solução inicial contável no microscópio. Neste exemplo, o fator de diluição é 10-2. Para calcular a concentração inicial da solução:
Contagem de células por mililitro ÷ fator de diluição = concentração de células
Para este exemplo, a contagem de células por mililitro é 206.000, e dividindo isso por 10-2 (0,01) dá uma concentração de células de 20.600.000 células por mililitro na amostra inicial.