Calcular o título de um vírus é uma maneira complicada de dizer que um cientista está contando o número de vírus em uma amostra específica. Para calcular os títulos de vírus, os cientistas infectam placas de bactérias em crescimento com soluções virais em concentrações variáveis e descobrir o número de vírus na solução original contando as bactérias que morreram devido ao vírus infecção.
Coloque luvas, encha 10 tubos de cultura com 9 ml de caldo e rotule-os como "10 ^ -1", "10 ^ -2", "10 ^ -3" e assim por diante até “10 ^ -10”. Esses tubos serão usados para diluições seriais virais usadas para calcular o fago título. Como os vírus podem atingir concentrações incrivelmente altas, você precisa diluí-los para contá-los com eficácia. Cada tubo representa uma diluição de dez vezes do vírus.
Pegue 1 ml da cultura misturada de seu tubo rotulado como “10 ^ -1” e transfira-o com uma nova pipeta para o próximo tubo, rotulado como “10 ^ -2”. Misture este tubo também.
Continue este padrão para criar uma série de diluição em série. Você acabará com 9 tubos de 9 ml e 1 tubo de 10 ml. As cargas virais em seus tubos serão diluídas em qualquer lugar de 10 vezes (seu primeiro tubo) ou 100 vezes (seu segundo tubo) a dez bilhões de vezes (seu tubo final).
Adicione duas gotas de cultura bacteriana ao ágar e misture delicadamente. Essas são as bactérias que serão mortas, permitindo que você conte o número de partículas de vírus em uma solução específica.
Adicione 1 ml de cada diluição em série ao tubo de ágar correspondente enquanto os tubos ainda estão no banho de água quente. Por exemplo, 1 ml de sua diluição em série 10 ^ -1 deve ir para o tubo de ágar rotulado como “10 ^ -1”.
Misture cada tubo e, em seguida, coloque cada tubo na placa de Petri com o rótulo correspondente. Isso criará uma fina camada de ágar que foi inoculada com bactérias e vírus em cada placa. Deixe as placas crescer durante a noite em uma incubadora.
Retire as placas da incubadora e examine-as. Você deve ver áreas turvas em toda a placa onde as bactérias cresceram, exceto por pequenos pontos claros chamados placas. Essas placas são manchas de bactérias mortas e cada placa representa um vírus.
Pegue o número de placas em seu prato e multiplique por 10. Se você contasse 157 placas, obteria 1570.
Multiplique o número obtido na etapa anterior pelo inverso do número do tubo de diluição. Por exemplo, se a placa que você selecionou foi a placa 10 ^ -5, você multiplicaria 1570 por 10 ^ 5 para obter 157000000. Este número final é o título do fago e representa o número de vírus por ml de sua cultura original.
