A eletroforese em gel é um dos principais métodos utilizados em biologia molecular para a análise de DNA. Este método envolve a migração de fragmentos de DNA através de um gel, onde são separados com base no tamanho ou forma. No entanto, mesmo um método cientificamente sólido, como a eletroforese em gel, não está imune a erros.
Como funciona a eletroforese
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A eletroforese em gel envolve o uso de um gel geralmente feito de polímeros como a agarose. O gel é imerso em uma solução tampão que conduz um campo elétrico. A amostra de DNA de interesse é primeiro fragmentada usando enzimas de restrição e, em seguida, é injetada no gel. Quando o campo elétrico é ligado, os fragmentos de DNA no gel migram em direção ao eletrodo positivo. Se os fragmentos de DNA forem de tamanhos diferentes, os tempos de migração serão diferentes para cada fragmento de tamanho. Os fragmentos são então visualizados usando um corante ou autorradiografia e são visíveis como bandas no gel.
Contaminação da Amostra
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A principal aplicação da eletroforese é como uma ferramenta para a análise de DNA em biologia molecular, mas também é usada em perícia como meio de identificar amostras de uma cena de crime. É importante que as fontes de erros nesta técnica sejam minimizadas para obter resultados precisos. Uma fonte de erro é a contaminação da amostra de DNA. Se houver DNA estranho na amostra, o gel terá mais bandas do que as encontradas em um gel que contém apenas a amostra purificada.
Problemas com o gel, a corrente e o tampão
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A concentração do gel também deve estar correta para evitar erros. Se a concentração for muito alta ou muito baixa, os fragmentos irão migrar muito lentamente ou muito rapidamente. Isso levará a erros na resolução das diferentes bandas. Durante a execução da eletroforese, deve-se tomar cuidado para garantir que a tensão esteja estável. Quaisquer flutuações na voltagem resultarão na migração instável de fragmentos de DNA, levando a erros na leitura das bandas. A solução tampão também deve ter a composição correta, pois um tampão com pH ou concentração iônica incorretos irá alterar a forma dos fragmentos de DNA, alterando também seus tempos de migração.
Visualização Adequada
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Mais importante ainda, o gel deve ser visualizado corretamente. Se a concentração do corante ou da sonda radioativa usada para visualizar as amostras for muito alta, a imagem resultante ficará muito confusa, pois fragmentos residuais também serão visualizados. Se a concentração do gel for muito baixa, não haverá visualização. Quando os processos corretos forem seguidos durante todas as etapas, a eletroforese em gel produzirá resultados que são precisos e podem ser usados com grande confiança. Como acontece com todos os procedimentos científicos, a eletroforese em gel pode estar sujeita a erros, mas eles podem ser minimizados com preparação e manuseio adequados.