Mikrobiologia to nauka o mikroorganizmach: mikroskopijnych lub ledwo widocznych jednokomórkowych formach życia, takich jak bakterie, archeony, pierwotniaki i niektóre grzyby, a nawet bardzo małe wielokomórkowe rośliny, zwierzęta i grzyby. Mikrobiolodzy badają również realistyczne zjawiska nieorganiczne, takie jak wirusy, priony, wiroidy i wiriony. „Mikrob” to termin ogólny dla wszystkich tych bytów. Liczenie w mikrobiologii to określenie liczby pojedynczych żywych drobnoustrojów w próbce; Możliwe są cztery podstawowe techniki.
Liczenie kultur
Jedną bezpośrednią miarą zliczania drobnoustrojów jest standardowa liczba płytek, zwana również liczbą żywych bakterii. W tym celu hodujesz próbkę, rozcieńczając ją, umieszczając na płytkach z pożywką hodowlaną i inkubując przez określony czas. Następnie policzysz liczbę kolonii i na podstawie tej liczby wywnioskujesz pierwotną liczbę drobnoustrojów w próbce. Technicznie rzecz biorąc, liczba drobnoustrojów nie podaje liczby pojedynczych drobnoustrojów, ale raczej „tworzenie kolonii”. jednostek”, ponieważ nie można mieć pewności, czy każda kolonia rzeczywiście pochodzi z jednego drobnoustroju, czy z niewielkiej grupy mikroby. Jednak te liczby są uważane za bardzo dokładne do oszacowania liczby drobnoustrojów w oryginalnych próbkach. Wadą jest to, że test ten jest czaso- i przestrzennie czasochłonny oraz wymaga specjalistycznego sprzętu, który musi być odpowiednio przygotowany.
Indywidualne zliczanie
Bezpośrednie zliczenia mikroskopowe, zwane również całkowitą liczbą komórek, to kolejna forma bezpośredniego zliczania. Najpierw dzielisz próbkę na kilka komór o jednakowej wielkości. Następnie określasz średnią liczbę drobnoustrojów w komorze, licząc niektóre lub wszystkie pod mikroskopem. Na koniec używasz tej średniej do obliczenia liczby w oryginalnej jednostce. Główną wadą bezpośrednich zliczeń mikroskopowych jest to, że trudno jest odróżnić żywe drobnoustroje od martwych, więc ta metoda może nie dać dokładnej liczby żywych.
Promienie światła, chmury mikrobów
Testy mętności są formami pośredniego zliczania. Zmętnienie to zmętnienie cieczy. W pomiarze turbidymetrycznym umieszczasz próbkę w roztworze, mierzysz zmętnienie nowego roztworu, przepuszczając przez niego światło za pomocą spektrofotometru, a następnie oszacuj liczbę żywych drobnoustrojów potrzebnych do wytworzenia obserwowanego poziomu zmętnienia. Wadą jest to, że ktoś musiał już wykonać wiele standardowych liczeń płytek danego drobnoustroju w zamówić wykonanie próbek roztworów o różnej mętności, aby mieć wzorzec do pomiaru aktualnej próbki przeciwko. Należy również uważać na nadmierne zagęszczanie próbki, ponieważ zliczanie turbidymetryczne jest dokładne tylko wtedy, gdy żadne drobnoustroje w próbce nie blokują innych. W wizualnym porównaniu zmętnienia porównujesz zmętnienie próbki ze zmętnieniem jednostki o tym samym rozmiarze i znanej liczbie drobnoustrojów i na podstawie tego porównania szacujesz wyliczenie.
Wyniki pośrednie
Dwie inne formy zliczania pośredniego to wyznaczanie masy i pomiar aktywności drobnoustrojów. Aby wyliczyć masę, ważysz ilość materiału biologicznego w swojej próbce, porównaj to waga do krzywej standardowej dla znanej liczby drobnoustrojów i oszacuj na tej podstawie pierwotną liczbę drobnoustrojów porównanie. W przypadku pomiaru aktywności drobnoustrojów mierzysz ilość produktu biologicznego w próbce, na przykład odpady metaboliczne, a następnie porównaj to ze standardową krzywą dla znanych zliczeń i oszacuj na tej podstawie swoje wyliczenie porównanie.