Głównym powodem, dla którego barwisz próbkę przed umieszczeniem jej pod mikroskopem, jest chęć lepszego przyjrzenia się jej, ale barwienie ma znacznie więcej niż tylko podkreślenie konturów komórek. Niektóre plamy mogą przenikać przez ściany komórkowe i uwydatniać składniki komórek, co może pomóc naukowcom w wizualizacji procesów metabolicznych. Plamy pomagają również odróżnić komórki żywe od martwych. Co więcej, barwienie pozwala naukowcom policzyć liczbę komórek określonego typu w określonej biomasie. Istnieje dwadzieścia lub więcej różnych rodzajów plam, a każdy z nich ma swój cel.
TL; DR (zbyt długi; Nie czytałem)
Głównym celem barwienia jest podkreślenie komórek i części komórek. Istnieje ponad 20 różnych rodzajów plam, a rodzaj plamy, której używasz, zależy od tego, czego szukasz.
Rodzaje plam
Wybór bejcy zależy od tego, czego szukasz. Nie wszystkie barwniki są odpowiednie dla żywych komórek, ale te, które są takie jak: brąz Bismarcka, czerwień toluenowa, błękit nilowy i czerwień nilowa, oraz niektóre barwniki fluorescencyjne używane do podświetlania DNA. Niektóre plamy podkreślają zarodniki, inne wykrywają lipidy i białka, a niektóre zmieniają kolor w obecności skrobi. Cel badania określa najlepszy rodzaj bejcy do zastosowania. Na przykład lekarz prowadzący badanie PAP użyłby eozyny Y. Jest to kwaśny barwnik fluorescencyjny, który zmienia kolor na czerwony w kontakcie z czerwonymi krwinkami, cytoplazmą i błonami komórkowymi. Służy również do badania szpiku.
W niektórych przypadkach badacz może użyć więcej niż jednej plamy. Na przykład hematoksylina jest barwnikiem, który zmienia kolor jądra komórkowego na niebieski. Stosowany w połączeniu z eozyną, która zmienia kolor pozostałych części komórki na czerwony lub różowy, zapewnia silniejszy kontrast i ułatwia różnicowanie jąder. Rozmazy PAP i próbki szpiku są łatwiejsze do zbadania, gdy te dwa barwniki są używane razem.
Plama Grama: Pracownicy szpitala używają barwnika Grama do identyfikacji szkodliwych bakterii. W rzeczywistości jest to seria barwników, które mają różny wpływ na różne rodzaje bakterii i stanowią ważne narzędzie diagnostyczne dla lekarzy. Barwienie Grama to trzyczęściowy proces. W pierwszym dodaje się fiolet krystaliczny Huckera, który barwi wszystkie bakterie na jednolity fioletowy kolor. W kolejnym etapie dodawany jest barwnik jodowy, który powoduje przyleganie koloru do komórek Gram-dodatnich, którymi są przede wszystkim Staphylococcus i Streptococcus. Barwnik jest wypłukiwany, pozostawiając komórki Gram-dodatnie o wyraźnym fioletowym kolorze; następnie wprowadza się trzeci barwnik, Safranine O, aby wzmocnić kontrast między bakteriami Gram-ujemnymi a resztą materiału na szkiełku.
Procedura barwienia
Przygotowując preparat na szkiełku, można go zamontować na sucho lub na mokro, pociąć na cienki skrawek lub posmarować. W przypadku stosowania barwnika, zwykle stosuje się mokry preparat, który polega na umieszczeniu kropli wody na szkiełku, zanurzeniu preparatu w wodzie i przykryciu szkiełkiem nakrywkowym. Następnie nanosisz barwnik na róg szkiełka zakraplaczem i pozwalasz, aby był on przyciągany w kierunku próbki przez działanie kapilarne. Pomocne jest umieszczenie ręcznika papierowego po przeciwnej stronie zjeżdżalni, aby przyciągnąć wodę. Gdy barwnik rozprzestrzeni się na całym szkiełku, próbka jest gotowa do badania.