Klonowanie TA jest prostą i wygodną metodą subklonowania produktów reakcji łańcuchowej polimerazy (PCR). „TA” to skrót od „tymina” i „adenina”. Ta technika klonowania wykorzystuje zdolność tyminy do hybrydyzacji z adeniną w obecności ligaz. Nie stosuje się enzymów restrykcyjnych, w przeciwieństwie do tradycyjnej metody subklonowania. Zamiast tego produkty PCR są amplifikowane przy użyciu enzymów polimeraz Taq.
metoda
Metoda klonowania TA wykorzystuje aktywność terminalnej transferazy niektórych nawisów kwasu dezoksyrybonukleinowego na każdym końcu produktu PCR.
Linearyzowany wektor do klonowania z pojedynczym, trzema wystającymi fragmentami prime-T (3'-T) zwany wektorem T jest używany do klonowania tego produktu PCR do wektora plazmidowego. Produkt PCR miesza się z tym wektorem w dużej proporcji.
Do mieszaniny dodaje się ligazę DNA (ligazę T4), co umożliwia hybrydyzację i łączenie obu produktów.
Zalety i wady
Klonowanie TA jest wygodną metodą subklonowania produktów PCR w linearyzowanym wektorze i jest znacznie prostsze i szybsze niż tradycyjne metody subklonowania. Ponieważ ta metoda nie wykorzystuje enzymów restrykcyjnych, produkty bez miejsc restrykcyjnych mogą być klonowane.
Wadą jest to, że zestawy do klonowania TA są bardzo drogie, a co za tym idzie ich użycie jest ograniczone. Poza tym nie ma klonowania kierunkowego; więc prawdopodobieństwo klonowania w przeciwnym kierunku jest większe.
Zestawy do klonowania TA
Kilku producentów sprzedaje zestawy do klonowania TA. Niektóre z nich to Invitrogen, QIAGEN i Premier Biosoft.