Test Western blot, zwany również immunoblottingiem, jest testem na określone białko w mieszaninie białek. Test Western blot jest wykonywany po elektroforezie żelowej lub teście immunoenzymatycznym (ELISA) i wykorzystuje przeciwciała do identyfikacji określonych białek.
Elektroforeza w żelu poliakrylamidowym z dodecylosiarczanem sodu (SDS-PAGE) jest powszechnym testem stosowanym do rozdzielania białek do zastosowania w analizie Western blot. Białka są rozdzielone pod względem masy i właściwości elektrycznych, gdy poruszają się przez żelową matrycę.
Test ELISA wykorzystuje enzymy lub przeciwciała przyczepione do stałej powierzchni w celu stworzenia powierzchni testowej. Następnie próbka jest dodawana do badanej powierzchni. Przeciwciała lub enzymy reagujące lub przyłączające się do białek wskazują na wynik dodatni.
Test Western blot przeprowadza się po elektroforezie żelowej. Oddzielone białka są przenoszone (lub blotowane) na membrany nitrocelulozowe lub nylonowe i identyfikowane przez specyficzne przeciwciała, które są znakowane przez drugorzędowe białko.
Test Western blot służy do potwierdzania pozytywnych wyników testów elektroforezy żelowej lub testu ELISA. Test Western blot może dokładniej identyfikować białka i wykluczać wyniki fałszywie dodatnie.