Sporządzić wykres stężenia produktu w funkcji czasu dla danych z pierwszej probówki testu enzymatycznego. Uwaga: oś pozioma powinna wskazywać „czas”, a oś pionowa „stężenie produktu”.
Oblicz linię regresji liniowej dla punktów danych wykreślonych w części 1, krok 1. Chociaż Excel i kalkulatory graficzne mogą łatwo określić ten model liniowy, możesz oszacować regresję nachylenie linii przez podzielenie różnicy stężenia produktu między sąsiednimi punktami danych przez ich różnicę w czasie.
Zapisz nachylenie linii regresji liniowej z sekcji 1, krok 2 jako „początkowa prędkość reakcji (Vo)”. Uwaga: w modelu linii regresji „[stężenie produktu] = m [czas] + b” współczynnik „m” jest nachylenie.
Powtórz kroki 1, 2 i 3 dla pozostałych probówek w teście.
Wykreśl odwrotność stężenia substratu dla każdej probówki w funkcji odwrotności jej początkowej szybkości reakcji (z części 1, krok 4). Na przykład, jeśli początkowa prędkość dla probówki o początkowym stężeniu substratu 50 mikromolar (uM) wyniosło 80 uM/s, odwrotności wyniosłyby 1/50 uM dla stężenia substratu i 1/80 uM/s dla początkowego prędkość. Uwaga: odwrotne stężenie substratu powinno znajdować się na osi poziomej, a odwrotna prędkość początkowa powinna znajdować się na osi pionowej.
Uwaga: stężenie substratu powinno znajdować się na osi poziomej, a początkowa prędkość reakcji na osi pionowej.
Określ linię regresji liniowej dla wykresu wykreślonego w sekcji 2, krok 1. Uwaga: ponieważ będziesz musiał znać punkt przecięcia y dla linii regresji, powinieneś wprowadzić punkty od Sekcja 2, Krok 1 do programu Excel lub kalkulatora graficznego i skorzystaj z wbudowanego modelowania regresji funkcjonalność.
Podziel 1 przez przecięcie y od linii regresji liniowej. To da ci wartość odwrotności Vmax, maksymalnej prędkości reakcji dla enzymu. Uwaga: jeśli model regresji liniowej przyjmuje postać „[Odwrotność Vo] = m [Odwrotne stężenie substratu] + b”, wówczas wartość „b” byłaby przecięciem y. Podziel 1 przez „b”, aby obliczyć odwrotność Vmax.
Podziel 1 przez wynik z rozdziału 2, krok 3, aby obliczyć rzeczywistą wartość Vmax.
Określ stężenie enzymu w oryginalnym teście (patrz dane surowe). Uwaga: stężenie enzymu jest takie samo we wszystkich probówkach; tylko stężenia substratu różnią się w teście.
Podziel Vmax (z sekcji 2, krok 4) przez stężenie enzymu (z sekcji 2, krok 5). Wynikiem jest wartość Kcat.
Copywriter z Chicago, Andy Pasquesi, ma duże doświadczenie w pisaniu dla branży motoryzacyjnej (BMW, MINI Cooper, Harley-Davidson), usług finansowych (Ivy Funds, William Blair, T. Rowe Price, CME Group), opieki zdrowotnej (Abbott) i dóbr konsumpcyjnych (Sony, Motorola, Knoll). Posiada licencjat z języka angielskiego na Uniwersytecie Harvarda, ale nie obchodzi go przecinek oksfordzki.