Gelelektroforese er en metode som brukes i laboratorier for å skille DNA (deoksyribonukleinsyre). Den kan også brukes til å skille RNA og proteiner.
Å lese gelelektroforeseresultater gjør det mulig for forskere å bestemme størrelsen på strengene i en prøve. For å forstå hvordan prosessen fungerer, må man først lære gelelektroforesedefinisjonen.
Gelelektroforese Definisjon
Gelelektroforese er et kraftig verktøy som brukes i molekylbiologi for å bestemme størrelsen og den elektriske ladningen til DNA, RNA og proteiner. Du starter med å bruke DNA-biter som ble fordøyd av enzymer fra en større DNA-streng.
Ved å bruke gelelektroforesebåndintensitet som resultat, kan du finne ut hvilken størrelse fragmentene er. Man kan da få en DNA fingeravtrykk.
Som den “elektro” delen av ordet avslører, a gelelektroforese definisjon innebærer bruk av et elektrisk felt. Det brukes en spesiell maskin som inneholder en bufferløsning som dekker elektrodene, en brønn som gelen kan suspendere på innsiden og elektroder i seg selv.
Gel i gelelektroforese
Gelelektroforese krever bruk av en gel formet til en plate som vanligvis er laget av en renset versjon av agar fra tang som kalles agarose.
Agarose geler lage en porøs matrise der ladede molekyler i forskjellige størrelser kan bevege seg i forskjellige hastigheter. Et kjemikalie kalt ethidiumbromid (EtBr) tilsettes til geløsningen før den helles i en form.
Hvis du har veldig små DNA- eller proteinmolekyler å skille, må du kanskje bruke en polyakrylamidgel i stedet for agarose. Ta hensyn når du bruker polyakrylamid, for det er nevrotoksisk.
En spesiell kam plasseres i agarosegelformen, og fjernes deretter forsiktig etter at den har stivnet. Dette er hvor DNA-fragmentet eller andre molekylære prøver er plassert, etter å ha blitt blandet med et spesielt fargestoff. De laste fargestoff er bare å spore bevegelsen av DNA, siden det ellers ikke er synlig.
Det er også en brønn som inneholder det som kalles a DNA-stige eller markør. Dette fungerer som en mal av høy kvalitet med kjente båndstørrelser, for størrelses sammenligning med DNA-prøvene som studeres. Når det elektriske feltet er påført, vil disse negativt ladede molekylene bevege seg gjennom gelen mot den positive enden.
Gelelektroforeseresultater
Når molekylene har reist til enden av gelen, er det tid for lesing gelelektroforese resultater. EtBr-fargestoffet i gelen binder seg lett til DNA, derav dets bruk, og så kan du se DNA-bånd fluorescerer under UV-lys.
Du må være nøye med å ikke berøre etidiumbromid, for dets tilhørighet til DNA betyr også at den kan koble den av; det regnes derfor som et mutagen. Nyere, tryggere fargestoffer er nå tilgjengelig, selv om prispoengene er høyere.
UV-lyset avslører gelelektroforesebåndintensiteten til DNA eller andre molekylære prøver. Plasseringen av båndene på en gel avslører størrelsen på DNA-fragment. De gelelektroforese båndintensitet avslører konsentrasjonen av molekylet.
Nå kan du sammenligne DNA-bånd i prøvene dine med DNA-stige-prøven. De kjente båndstørrelsene på stigen vil hjelpe deg med å bestemme den relative størrelsen på DNA du studerer.
Viktigheten av kvalitetsgelelektroforese
Gelelektroforese har blitt brukt i DNA fingeravtrykk og rettsmedisin. Det har hjulpet forskere med å bestemme informasjon om genomene til mange arter. Bruk av gelelektroforese av høy kvalitet er avgjørende for disse viktige feltene.
Det er derfor avgjørende å jobbe med ingredienser av høy kvalitet og være nøye med å lage geler. Det er viktig å forhindre forurensning av DNA-prøver med RNA eller proteiner.
Sørg for å bruke ren buffer, hell gelen forsiktig slik at kambrønnene blir jevnt formet og hold alle reagensene på riktig temperatur. Gelelektroforese båndintensiteten skal være levende og ren, uten spor av annet DNA i bakgrunnen, og ingen flekker av RNA eller proteiner som forurenser gelen.