Hovedårsaken til at du flekker et eksemplar før du legger det under mikroskopet, er å se bedre på det, men flekker gjør mye mer enn bare å markere cellens omriss. Noen flekker kan trenge gjennom cellevegger og fremheve cellekomponenter, og dette kan hjelpe forskere å visualisere metabolske prosesser. Flekker hjelper også med å skille mellom levende celler og døde. Videre lar farging forskere telle antall celler av en bestemt type i en bestemt biomasse. Tjue eller flere forskjellige typer flekker eksisterer, og hver har sitt formål.
TL; DR (for lang; Leste ikke)
Hovedformålet med farging er å markere celler og deler av celler. Over 20 forskjellige typer flekker eksisterer, og hvilken flekk du bruker, avhenger av hva du leter etter.
Typer av flekker
Valget av flekk avhenger av hva du leter etter. Ikke alle flekker er egnet for levende celler, men de som er inkluderer Bismarck brown, toluen rød, Nile blue og Nile red, og visse fluorescerende stoffer som brukes til å fremheve DNA. Noen flekker fremhever sporer, noen oppdager lipider og proteiner, og noen endrer farge i nærvær av stivelse. Formålet med undersøkelsen bestemmer den beste typen flekker å bruke. For eksempel vil en lege som utfører en PAP-utstrykning bruke Eosin Y. Det er et surt fluorescerende fargestoff som blir rødt når det kommer i kontakt med røde blodlegemer, cytoplasma og cellemembraner. Det brukes også til å teste blodmarg.
I noen tilfeller kan en etterforsker bruke mer enn en flekk. For eksempel er hematoksylin en flekk som gjør cellekjerner blå. Når den brukes sammen med eosin, som gjør de andre delene av cellen rød eller rosa, gir den en sterkere kontrast og gjør det lettere å skille kjernene. PAP-flekker og blodmargprøver er lettere å undersøke når disse to flekkene brukes sammen.
Gram's Stain: Sykehusarbeidere bruker Grams flekk for å identifisere skadelige bakterier. Dette er faktisk en serie fargestoffer som har forskjellige effekter på forskjellige typer bakterier og gir leger et viktig diagnostisk verktøy. Grams flekk er en tredelt prosess. I den første tilsettes Huckers krystallfiolett, som flekker alle bakterier i en jevn fiolett farge. I neste trinn tilsettes jodflekk, som får fargen til å feste seg til Gram-positive celler, som primært er Staphylococcus og Streptococcus. Flekken blir vasket bort, og etterlater de gram-positive cellene med en tydelig fiolett farge; deretter introduseres en tredje flekk, Safranine O, for å forbedre kontrasten mellom de gramnegative bakteriene og resten av materialet i lysbildet.
Fargeprosedyre
Når du forbereder en prøve på et lysbilde, kan du tørke eller våtmontere den, du kan skjære den i en tynn seksjon eller smøre den. Når du bruker en flekk, er den vanlige prosedyren å våtmontere prøven, som betyr å plassere en dråpe vann på lysbildet, sette prøven i vannet og dekke den med en dekkglass. Du påfører deretter flekken på et hjørne av lysbildet med en dropper og lar den trekkes mot prøven ved kapillærvirkning. Det hjelper å legge et papirhåndkle på motsatt side av lysbildet for å tiltrekke vannet. Når flekken har spredt seg over hele lysbildet, er prøven klar for undersøkelse.