Flytende næringssuppe brukes til å dyrke bakterier som Escherichia coli. Oppskrifter på denne buljongen varierer avhengig av bakteriearten og tilstedeværelsen av genetiske modifikasjoner, for eksempel antibiotikaresistens. Kjøttkraften kan stivnes ved å tilsette agar, som gjør det mulig for bakteriene å danne distinkte kolonier, mens de i flytende kultur rett og slett spres i hele volumet. Dette er en grunnleggende, men viktig teknikk for avanserte metoder som genkloning eller mikrobiologiske analyser. Denne artikkelen forutsetter at standard laboratorium Escherichia coli-stammer skal dyrkes på Luria buljong (LB) agarplater (eller petriskåler).
Vei ut 10 gram trypton av bakteriell kvalitet, 5 gram gjærekstrakt, 5 gram natriumklorid, 15 gram agar eller agarose og 1 ml 1N natriumhydroksid. Bland disse med et volum destillert og autoklavert sterilt vann til 1 liter medium er oppnådd. Autoklaver mediet i løst lukkede flasker eller kolber i 25 minutter. La avkjøles til omtrent 50 grader Celsius før du tilsett reagenser som vil bli ødelagt ved høy varme, for eksempel antibiotika eller andre kosttilskudd.
La autoklaverte medier avkjøles til 50 grader Celsius og ikke lavere enn 45 Celsius, da agaren vil sette seg i beholderen før den kan helles. Skaff deg sterile petriskåler og hell nok til å dekke hele overflaten på platen og minst halvparten av dybden. Unngå overfylling av platene, og la ikke agaren komme i kontakt med den øvre kanten av fatet. La platene stivne i et sterilt miljø (f.eks. Under en laminær strømningshette) ved å la dekslene av og til et hjørne av hetten.
Tørk platene. Selv om platene kan brukes så snart de er satt, vil det være noe fuktighet på overflaten av agaren, noe som vil forhindre at bakteriekolonier fester seg tilstrekkelig. Derfor er det best å tørke platene før du påfører bakterier, for eksempel ved å la dem sitte ute romtemperatur i noen dager eller i en halv time under en laminær hette eller i en 37 graders Celsius inkubator.
Oppbevar platene. Tørkede plater skal stables opp ned (omvendt) på lokkene og returneres til originalen emballasje, teipet og enten pakket i folie for å beskytte mot lys eller i et passende container. Skriv alltid klargjøringsdatoen på platene og unngå å bruke hvis platene er mer enn 2 måneder gamle.
Referanser
- "Nåværende protokoller i molekylærbiologi"; Karen Elbing og Roger Brent; 2002
Tips
- Utfør så mange av trinnene ovenfor (helst alle) som mulig i et sterilt miljø (f.eks. Under en åpen flamme, eller en laminær hette) for å hindre at luftbårne bakterielle forurensninger kommer inn og vokser i media.
om forfatteren
Palmer Owyoung har en Master of Arts i internasjonal virksomhet fra University of California i San Diego og en Bachelor of Arts i sosiologi fra University of California i Santa Barbara og er utdannet molekylær biolog. Han har vært frilansskribent siden 2006. I tillegg til å skrive, er han en heltidsforhandler og internettmarkedsfører på heltid.
Fotokreditter
Jupiterimages / Comstock / Getty Images