TA-kloning er en enkel og praktisk metode for subkloning av polymerasekjedereaksjon (PCR) -produkter. "TA" er forkortelse for "tymin" og "adenin." Denne kloningsteknikken bruker evnen til tymin til å hybridisere til adenin i nærvær av ligaser. Restriksjonsenzymer brukes ikke, i motsetning til den tradisjonelle subkloningsmetoden. I stedet amplifiseres PCR-produkter ved bruk av Taq-polymeraser-enzymer.
Metode
TA-kloningsmetoden bruker den terminale transferaseaktiviteten til visse deoksyribonukleinsyreoverheng til hver ende av PCR-produktet.
En linearisert kloningsvektor med enkle, tre prime-T (3'-T) overheng kalt en T-vektor, brukes til å klone dette PCR-produktet i en plasmidvektor. PCR-produktet blandes i høy andel med denne vektoren.
DNA-ligase (T4-ligase) tilsettes til blandingen, som gjør det mulig for de to produktene å hybridisere og bli med.
Fordeler og ulemper
TA-kloning er en praktisk metode for å subklone PCR-produkter i den lineariserte vektoren, og det er mye enklere og raskere enn tradisjonelle subkloningsmetoder. Fordi denne metoden ikke bruker restriksjonsenzymer, kan produkter uten restriksjonsenzymsteder klones.
En ulempe er at TA-kloningsett er veldig dyre, og dermed er bruken av dem begrenset. Dessuten er det ingen retningskloning; så sannsynligheten for kloning i motsatt retning er større.
TA-kloningsett
Flere produsenter selger TA-kloningsett. Noen er Invitrogen, QIAGEN og Premier Biosoft.
