Læreren din gir deg en prøve av bakterier og spør deg: Hvor mange levedyktige mikroorganismer er det i denne prøven? Hva betyr dette, og hvordan finner du ut av det? En metode er ved å finne antall kolonidannende enheter(CFU).
Hva er CFU?
CFU refererer til antall individuelle kolonier av mikroorganismer som vokser på en plate av media. Denne verdien representerer igjen antall bakterier som er i stand til å replikere ettersom de har dannet kolonier på platen. Det er en CFU-formel som involverer prøvetaking.
Hvordan finner du CFU?
Å telle antall bakterier i en væskeprøve er veldig vanskelig. Det er for mange av dem, og de er for små. Videre kan noen av dem være døde og andre i live, og de døde skal ikke regne med totalsummen. Du er bare interessert i levedyktig bakterier, eller bakterier som kan replikere. Så hvordan kan du finne ut hvor mange bakterier du har?
På samme måte som du kan ta en avstemning på 1000 mennesker og bruke den på 10.000 mennesker for å finne ut hvordan de kan tenke på et bestemt emne. Du kan prøve å ta en liten del av den opprinnelige prøven, finne ut hvor mange bakterier det er i den delen, og beregne deretter for å beregne hvor mange det kan ha vært i originalen prøve.
Bruke fortynninger for å finne CFU
Fremgangsmåten for å finne CFU for en gitt prøve innebærer først å fortynne prøven. Fortynningene blir deretter belagt på plater med riktig vekstmedium. Flere fortynninger er ofte en god ide siden den opprinnelige prøven kan være veldig konsentrert.
Etter å ha tillatt bakteriene å vokse på platene i en gitt tid, individuelle kolonier telles på en plate. Hvis prøven var for konsentrert, vil du i stedet for individuelle kolonier se et stort område dekket med bakterievekst som kalles a plen. Dette betyr at du bør fortynne prøven din ytterligere og prøve å vokse igjen slik at du kan se individuelle kolonier.
Ettersom individuelle kolonier kommer fra en enkelt bakterie som replikerte seg mange ganger, teller bare disse mot CFU.
Eksperimentell prosedyre for å finne CFU
Et eksempel på bruk av fortynninger for å gjøre en CFU-beregning kan gå som følger: Først, fra den første prøven læreren din gir deg, tar du 1 ml og plater den. Dagen etter ser du at det er en plen med bakterier. Dette betyr at du ikke kan telle antall CFU. Det neste trinnet er å gjøre noen fortynninger.
Først tar du 1 ml prøve og fortynner den i 9 ml flytende media. Siden fortynningen er en delprøve til ni deler fortynningsmiddel, blir det referert til som en 1:10 fortynning. Deretter tar du 1 ml av fortynningen 1:10 og legger til 9 ml flytende medium. Denne fortynningen er en fortynning på 1: 100. Til slutt lager du en fortynning på 1: 1000 ved å ta 1 ml av fortynningen 1: 100 og tilsette 9 ml flytende medium. For hver fortynning har du nå 10 ml fortynnet bakteriekultur.
Fortynninger ferdig, du plater 0,5 ml av fortynningene på platene. Sørg for å merke platene som fortynningen ble belagt med.
Dagen etter kommer du tilbake og ser at alle platene har noen individuelle kolonier. Du vil velge en tallerken mellom 30 og 300 kolonier. Du ser at fortynningsplaten 1: 1000 har omtrent 10 kolonier, så det betyr at du overfortynner prøven. Den platen vil ikke være nyttig for å finne CFU.
Fortynningsplaten 1:10 har mange kolonier, kanskje mer enn 300. I så fall kan du gå på 1: 100-platen. Du teller koloniene på denne platen og finner ut at den har 179 kolonier. Dette betyr at 0,5 ml av 1: 100 fortynningen inneholder 179 CFU. Men hva med den opprinnelige prøven?
Hva er CFU-beregning?
Nå som du har noen data, kan du gjøre CFU-beregningen i den opprinnelige prøven.
1. Ta mengden du belagt (0,5 ml) og multipliser med fortynningsfaktoren (0,01) for å gi 0,005. Du må gjøre dette for å finne fortynningsfaktoren som ga CFU-tellingen. Her tillot en halv milliliter av fortynningen 1: 100 deg å telle CFU.
2. Del CFU fra fortynning (179) med resultatet fra trinn 1 (0.005) for å gi 35.800 CFU.
Dette betyr at den opprinnelige 1 ml prøven som ble fortynnet inneholder 35.800 CFU. En annen måte å si dette på er å si at den opprinnelige prøven har 35 800 CFU / ml.
CFU er et flott verktøy for å finne hvor mange bakterier, sopp eller andre mikroorganismer det er i en gitt prøve. Pletteringsmetoden beskrevet her er spesielt nyttig for veldig konsentrerte prøver eller organismer som ikke vokser godt i flytende kultur.
