Het berekenen van de titer voor een virus is een ingewikkelde manier om te zeggen dat een wetenschapper het aantal virussen in een bepaald monster telt. Om virustiters te berekenen, infecteren wetenschappers platen van groeiende bacteriën met virale oplossingen in verschillende concentraties en bereken het aantal virussen in de oorspronkelijke oplossing door de bacteriën te tellen die zijn gestorven als gevolg van het virus infectie.
Trek handschoenen aan, vul 10 kweekbuisjes met 9 ml bouillon en label ze met "10^-1", "10^-2", "10^-3" en zo verder tot "10^-10." Deze buizen zullen worden gebruikt voor virale seriële verdunningen die worden gebruikt om faag te berekenen titer. Omdat virussen tot ongelooflijk hoge concentraties kunnen groeien, moet je ze verdunnen om ze effectief te tellen. Elke buis vertegenwoordigt een tienvoudige verdunning van het virus.
Neem 1 ml van de gemengde cultuur uit uw buis met het label "10 ^ -1" en breng deze over met een nieuwe pipet naar de volgende buis, met het label "10 ^ -2". Mix ook deze tube.
Ga door met dit patroon om een seriële verdunningsreeks te maken. Je krijgt dan 9 tubes van 9 ml en 1 tube van 10 ml. De virale ladingen in uw buisjes worden overal verdund, van 10 keer (je eerste buisje) of 100 keer (je tweede buisje) tot tien miljard keer (je laatste buisje).
Voeg twee druppels bacteriecultuur toe aan je agar en meng het voorzichtig. Dit zijn de bacteriën die worden gedood, waardoor je het aantal virusdeeltjes in een bepaalde oplossing kunt tellen.
Voeg 1 ml van elke seriële verdunning toe aan de bijbehorende agarbuis terwijl de buisjes nog in het warmwaterbad staan. Bijvoorbeeld, 1 ml van uw 10^-1 seriële verdunning moet in de agarbuis met het label "10^-1" gaan.
Meng elke buis en giet vervolgens elke buis in de Petri-plaat met het bijbehorende etiket. Hierdoor ontstaat in elke plaat een dunne laag agar die is ingeënt met bacteriën en virussen. Laat de platen 's nachts groeien in een incubator.
Haal je platen uit de couveuse en onderzoek ze. Je zou overal op de plaat troebele gebieden moeten zien waar bacteriën zijn gegroeid, behalve kleine heldere plekken die plaques worden genoemd. Deze plaques zijn plekken met dode bacteriën en elke plaque vertegenwoordigt één virus.
Neem het aantal plaques op je bord en vermenigvuldig dit met 10. Als je 157 plaquettes zou tellen, zou je 1570 krijgen.
Vermenigvuldig het getal dat je in de vorige stap hebt gekregen met het omgekeerde van het getal op je verdunningsbuisje. Als de geselecteerde plaat bijvoorbeeld de 10^-5-plaat was, vermenigvuldigt u 1570 met 10^5 om 157000000 te krijgen. Dit laatste getal is uw faagtiter en vertegenwoordigt het aantal virussen per ml van uw oorspronkelijke kweek.