Een van de klassieke manieren om de concentratie van microben in een monster te bepalen, is door het monster te verdunnen, de microben op platen te laten groeien en de kolonies te tellen. De geplateerde microben groeien uit een kolonievormende eenheid bestaande uit een of meer cellen tot een zichtbare kolonie die kan worden gezien en geteld. Bacteriën zijn de meest voorkomende microbe om te beoordelen met behulp van plaattellingen. Kolonietellingen worden gebruikt om microben in bodem, water en voedsel te detecteren en te tellen. Protocollen voor het tellen van kolonies benadrukken een nauwkeurige en methodische aanpak.
Monsters verdunnen, plateren en incuberen
Als je gewoon een microbemonster op een agarplaat smeert, zie je zoveel kolonievormende eenheden dat de afzonderlijke kolonies samenvloeien, waardoor ze onmogelijk te tellen zijn. Om dit probleem op te lossen, meng je het monster in een vloeibaar medium, neem je een kleine hoeveelheid van dat mengsel en verdun je het verder. Herhaal dit proces zes tot tien keer. Verspreid de laatste verdunning op een agarplaat en incubeer deze gedurende vier tot zeven dagen voordat je de kolonies telt.
Handmatig tellen
De belangrijkste truc bij het tellen van kolonies is om elke koloniepunt één keer te tellen. Eén benadering is om de petrischaal op een rasterachtergrond te plaatsen en de kolonies in elke rastercel te tellen, waarbij u in een methodisch patroon door alle cellen beweegt. Het markeren van getelde kolonies op de achterkant van de petrischaal kan ook een nuttige benadering zijn. Over het algemeen moet u ten minste drie platen tellen; gebruik alleen platen met 30 tot 300 kolonies om robuuste conclusies te trekken, suggereert het Microbiology Network, een bedrijf dat adviesdiensten levert aan laboratoria en fabrikanten. Platen met kolonies die te talrijk zijn om te tellen of met te weinig kolonies moeten opnieuw worden uitgeplaat vanuit een nieuwe verdunning.
Geautomatiseerd tellen
Menselijke fouten dragen bij aan de tijd die nodig is om kolonies handmatig te tellen. Om zowel de nauwkeurigheid als de efficiëntie te verbeteren, plaatst u de petrischaal in een geautomatiseerd kolonietelapparaat. Geautomatiseerde kolonietellers nemen een afbeelding van de schaal, scheiden de kolonies van de achtergrond en gebruiken vervolgens een algoritme om de kolonies op de plaat te tellen. De algoritmen kunnen problemen hebben met het onderscheiden van kolonies wanneer twee of meer kolonies elkaar aan de randen raken, dus dit is een gebied van voortdurende softwareontwikkeling.
Tellen ingewikkelder maken
De nauwkeurigheid van het berekenen van de dichtheid van microben uit kolonietellingen heeft enkele beperkingen. Kolonievormende eenheden kunnen een enkele cel, een keten van cellen of een hele klomp cellen zijn. De aanname is dat een kolonie één cel vertegenwoordigt, dus concentraties berekend op basis van kolonietellingen kunnen laag zijn. Verschillende microben hebben verschillende groeiomstandigheden nodig en de kolonies op de plaat vertegenwoordigen alleen die microben die onder die incubatieomstandigheden op die groeimedia gedijen. Bovendien registreert kolonietelling geen dode cellen, een belangrijke overweging wanneer u de concentratie van cellen in het oorspronkelijke monster nodig heeft.