HPLC biedt een snelle, geautomatiseerde en zeer nauwkeurige methode om bepaalde chemische componenten in een monster te identificeren, maar het kan kostbaar en complex zijn en werkt niet voor alle monsters. Medische, forensische, milieu- en productielaboratoria gebruiken de techniek om de chemicaliën in een monster te kwantificeren en te scheiden. HPLC heeft zowel voor- als nadelen in vergelijking met andere technieken.
HPLC en soortgelijke technieken
Net als andere vormen van chromatografie maakt HPLC de scheiding van chemische bestanddelen mogelijk door het gebruik van een mobiele fase en een stationaire fase. De mobiele fase is vloeibaar en de stationaire fase is vast. Omdat de verschillende componenten met verschillende snelheden bewegen, worden ze van elkaar gescheiden. Alternatieve technieken zijn onder meer capillaire elektroforese, waarbij stoffen migreren door oplossingen in een elektrische veld en andere chromatografische methoden zoals vastefase-extractie, gaschromatografie en dunne laag; chromatografie.
Snelheid, efficiëntie en nauwkeurigheid
In vergelijking met andere chromatografische technieken, zoals TLC, is HPLC extreem snel en efficiënt. Het gebruikt een pomp, in plaats van zwaartekracht, om een vloeibaar oplosmiddel door een vast adsorberend materiaal te persen, waarbij verschillende chemische componenten worden gescheiden terwijl ze met verschillende snelheden bewegen. Het proces kan in ongeveer 10 tot 30 minuten worden voltooid en levert een hoge resolutie. Het is nauwkeurig en zeer reproduceerbaar. Omdat het grotendeels geautomatiseerd is, kunnen basis HPLC-runs worden uitgevoerd met minimale training.
Kosten en complexiteit
Ondanks de voordelen kan HPLC kostbaar zijn, waarbij grote hoeveelheden dure organische stoffen nodig zijn. Technieken zoals vastefase-extractie en capillaire elektroforese kunnen goedkoper en zelfs sneller zijn, vooral voor analyse onder goede fabricagepraktijken. Hoewel het relatief eenvoudig is om bestaande HPLC-methoden te gebruiken, kan het complex zijn om problemen op te lossen of nieuwe methoden te ontwikkelen. Dit komt grotendeels door het scala aan verschillende modules, kolommen en mobiele fasen.
Gevoeligheid en resolutie
Over het algemeen is HPLC veelzijdig en uiterst nauwkeurig als het gaat om het identificeren en kwantificeren van chemische componenten. Met veel betrokken stappen is de precisie van HPLC grotendeels te danken aan het automatiseren van het proces en daarom zeer reproduceerbaar. HPLC heeft een lage gevoeligheid voor bepaalde verbindingen, en sommige kunnen niet worden gedetecteerd omdat ze onomkeerbaar worden geadsorbeerd. Vluchtige stoffen worden beter gescheiden door gaschromatografie.