Titra aprēķināšana vīrusam ir sarežģīts veids, kā pateikt, ka zinātnieks skaita vīrusu skaitu konkrētajā paraugā. Lai aprēķinātu vīrusu titrus, zinātnieki inficē augošu baktēriju plāksnes ar vīrusu šķīdumiem dažādās koncentrācijās un noskaidrojiet vīrusu skaitu sākotnējā šķīdumā, saskaitot baktērijas, kas mirušas vīrusa dēļ infekcija.
Uzvelciet cimdus, piepildiet 10 kultūras mēģenes ar 9 ml buljona un marķējiet tos “10 ^ -1”, “10 ^ -2”, “10 ^ -3” un tā līdz “10 ^ -10”. Šīs caurules tiks izmantotas vīrusu sērijveida atšķaidījumiem, ko izmanto fāga aprēķināšanai titrs. Tā kā vīrusi var izaugt līdz neticami lielai koncentrācijai, jums tie ir jāatšķaida, lai tos efektīvi saskaitītu. Katra mēģene apzīmē vīrusa desmitkārtīgu atšķaidījumu.
No mēģenes ar uzrakstu “10 ^ -1” ņem 1 ml jauktas kultūras un pārnes to ar jaunu pipeti uz nākamo mēģeni ar uzrakstu “10 ^ -2”. Sajauciet arī šo mēģeni.
Turpiniet šo modeli, lai izveidotu sērijveida atšķaidīšanas sēriju. Jūs iegūsiet 9 caurules ar 9 ml un 1 mēģeni ar 10 ml. Vīrusu slodzes jūsu mēģenēs tiks atšķaidītas no 10 reizēm (jūsu pirmā caurule) vai 100 reizēm (jūsu otrā caurule) līdz desmit miljardiem reižu (jūsu pēdējā caurule).
Pievienojiet agaram divus pilienus baktēriju kultūras un viegli samaisiet. Šīs ir baktērijas, kuras tiks iznīcinātas, ļaujot jums saskaitīt vīrusu daļiņu skaitu konkrētā šķīdumā.
Pievienojiet 1 ml katras sērijas atšķaidījuma attiecīgajai agara mēģenei, kamēr mēģenes vēl atrodas karstā ūdens vannā. Piemēram, 1 ml no jūsu 10 ^ -1 sērijas atšķaidījuma jāiet agara mēģenē ar apzīmējumu “10 ^ -1”.
Katru mēģeni sajauc un pēc tam katru mēģeni ielej Petri plāksnē ar atbilstošo etiķeti. Tas izveidos plānu agara slāni, kas katrā plāksnē ir inokulēts ar baktērijām un vīrusiem. Ļaujiet plāksnēm nakti izaugt inkubatorā.
Izvelciet plāksnes no inkubatora un pārbaudiet tās. Visā plāksnē, kur ir izaugušas baktērijas, jums vajadzētu redzēt mākoņainus apgabalus, izņemot mazus skaidrus plankumus, ko sauc par plāksnēm. Šīs plāksnes ir mirušu baktēriju plankumi, un katra plāksne apzīmē vienu vīrusu.
Paņemiet plāksnīšu skaitu savā šķīvī un reiziniet ar 10. Ja jūs saskaitītu 157 plāksnes, jūs saņemtu 1570.
Reiziniet iepriekšējā solī iegūto skaitli ar apgriezto skaitli uz atšķaidīšanas mēģenes. Piemēram, ja jūsu izvēlētā plāksne bija 10 ^ -5 plāksne, jūs reizinātu 1570 ar 10 ^ 5, lai iegūtu 157000000. Šis pēdējais skaitlis ir jūsu fāga titrs un norāda vīrusu skaitu uz ml jūsu sākotnējās kultūras.