Viens no klasiskajiem veidiem, kā noteikt mikrobu koncentrāciju paraugā, ir parauga atšķaidīšana, mikrobu audzēšana uz plāksnēm un koloniju saskaitīšana. Pārklātie mikrobi no kolonijas veidojošās vienības, kas sastāv no vienas vai vairākām šūnām, izaug par redzamu koloniju, kuru var redzēt un saskaitīt. Baktērijas ir visizplatītākais mikrobs, ko novērtēt, izmantojot plākšņu skaitu. Koloniju uzskaiti izmanto, lai noteiktu un uzskaitītu mikrobus augsnē, ūdenī un pārtikā. Koloniju skaitīšanas protokoli uzsver precīzu un metodisku pieeju.
Paraugu atšķaidīšana, pārklāšana un inkubācija
Ja jūs vienkārši uzsmērējat mikroba paraugu uz agara plāksnes, jūs redzēsiet tik daudz koloniju veidojošu vienību, ka atsevišķas kolonijas saplūdīs kopā, padarot tās neiespējamas saskaitīt. Lai atrisinātu šo problēmu, samaisiet paraugu šķidrā vidē, paņemiet nelielu daudzumu šī maisījuma un turpiniet to atšķaidīt. Atkārtojiet šo procesu sešas līdz 10 reizes. Izplatiet pēdējo atšķaidījumu uz agara plāksnes un inkubējiet to četras līdz septiņas dienas, pirms skaitāt kolonijas.
Manuāla skaitīšana
Koloniju skaitīšanas primārais triks ir skaitīt katru kolonijas punktu vienu reizi. Viena pieeja ir noteikt Petri trauciņu uz režģa fona un saskaitīt kolonijas katrā režģa šūnā, metodiski pārvietojoties pa visām šūnām. Noderīga pieeja var būt arī saskaitīto koloniju atzīmēšana Petri trauka aizmugurē. Parasti jums būs jāsaskaita vismaz trīs plāksnes; Izmantojiet tikai plāksnes, kas satur 30 līdz 300 kolonijas, lai izdarītu pārliecinošus secinājumus, iesaka uzņēmums Microbiology Network, kas sniedz konsultāciju pakalpojumus laboratorijām un ražotājiem. Plātnes ar kolonijām, kuru skaitīšanai ir pārāk daudz, vai ar pārāk maz koloniju, no jauna jāatšķaida.
Automatizēta skaitīšana
Cilvēka kļūdas palielina laiku, kas vajadzīgs koloniju skaitīšanai manuāli. Lai uzlabotu gan precizitāti, gan efektivitāti, Petri trauku ievieto automatizētā koloniju skaitīšanas ierīcē. Automatizētie koloniju skaitītāji uzņem trauku attēlu, izceļ kolonijas no fona un pēc tam ar algoritmu saskaita kolonijas uz plāksnes. Algoritmiem var būt grūtības atšķirt kolonijas, kad divas vai vairākas kolonijas pieskaras malām, tāpēc šī ir nepārtraukta programmatūras izstrādes joma.
Padarīt skaitīšanu sarežģītāku
Mikrobu blīvuma aprēķināšanas precizitātei no koloniju skaita ir daži ierobežojumi. Kolonijas veidojošās vienības var būt viena šūna, šūnu ķēde vai vesela šūnu kopa. Pieņēmums ir tāds, ka kolonija pārstāv vienu šūnu, tāpēc koncentrācija, kas aprēķināta pēc koloniju skaita, var būt zema. Dažādiem mikrobiem nepieciešami atšķirīgi augšanas apstākļi, un kolonijas uz plāksnes attēlo tikai tos mikrobus, kas uzplaukst šajā augšanas vidē šajos inkubācijas apstākļos. Turklāt koloniju skaitīšana nereģistrē atmirušās šūnas, kas ir svarīgs apsvērums, kad nepieciešama šūnu koncentrācija sākotnējā paraugā.