Augstas veiktspējas šķidruma hromatogrāfija ir metode maisījuma laboratoriskai analīzei. Tas ir efektīvs hromatogrāfijas veids, kas maisījuma parauga virzīšanai caur kolonnu izmanto augstu spiedienu, nevis vienkārši gravitāciju. Paraugs tiek injicēts, pēc tam sūknis ar lielu spiediena daudzumu palīdz pārvietot paraugu pa iesaiņotu kolonnu, kur tas tiek sadalīts atsevišķos komponentos. Pēc tam šo atdalīšanu analizē detektors, lai iegūtu rezultātus.
Injekcijas vieta
Lai ievadītu HPLC, paraugs vispirms jāizšķīdina polārā šķidrā šķīdinātājā, vēlams tādā, kurā ir zināmi HPLC spektri, lai tā datus varētu atšķirt no parauga. Šķidro šķīdumu, kas satur paraugu, ievieto instrumentā un nosūta kolonnā. Injekcijas vietas faktiskā atrašanās vieta ir atkarīga no instrumentu zīmola. Vairumā gadījumu injekcijas process tiek automatizēts, bet dažos gadījumos laboratorijas darbiniekam paraugs jāinjicē, izmantojot nelielu šļirces adatu.
Sūkņa komponents
HPLC vienības sūkņa sastāvdaļa ir nepieciešama, jo tā nodrošina spiedienu, kas izspiež paraugu caur kolonnu. Sūkņa stiprums mainās, bet jaudīgs var radīt spiedienu līdz 6000 psi vai mārciņām uz kvadrātcollu, kas tiek piemērots pēc parauga injicēšanas. Tas ļauj paraugam iziet cauri kolonnai ātrāk un efektīvāk nekā tad, ja tas pilētu cauri, izmantojot tikai gravitācijas spēku.
Kolonnas apraksts
Palielināts parauga ātrums, kas caur kolonnu izvadīts caur sūkni, ļauj izmantot cita veida kolonnu nekā tie, kurus izmanto vienkāršā šķidruma hromatogrāfijā. Kolonnas iepakojuma materiālam var būt daudz mazāks daļiņu izmērs, kas palielina virsmas laukumu un tādējādi palīdz parauga mijiedarbībai ar kolonnu. Lielākā daļa HPLC kolonnu darbojas caur polaritāti. Paraugu izšķīdina polārajā šķīdinātājā, un kolonnu veido galvenokārt nepolāri ogļūdeņraži. Parauga molekulas polārās daļas ļoti ātri iziet cauri kolonnai, jo tās galvenokārt mijiedarbojas ar šķīdinātājs, bet parauga nepolārie komponenti kavējas kolonnā, veidojot vāju mijiedarbību ar kolonnu komponentiem. Tāpēc parauga sastāvdaļas nokrīt no kolonnas secībā no polārākās līdz nepolārajai.
Detektora funkcija
Detektori atšķiras arī atkarībā no izmantotā HPLC instrumenta veida. Tomēr lielākā daļa darbojas tādā pašā pamata veidā. Kad atdalās no kolonnas, uz atdalītajiem parauga komponentiem spīd ultravioletās gaismas avots. Lielākā daļa organisko savienojumu absorbē noteiktu daudzumu gaismas, tāpēc, ejot garām pielietotajam gaismas staram, detektors var uztvert, cik daudz gaismas absorbē. Detektors arī reģistrē komponentu aiztures laiku, pamatojoties uz secību, kādā tie iziet no kolonnas. Pēc tam šo rezultātu var analizēt, pamatojoties uz maksimuma laukumu, lai noteiktu precīzu parauga sastāvdaļu raksturu.