Gelio elektroforezė yra metodas, naudojamas laboratorijose atskirti DNR (Deoksiribonukleorūgštis). Jis taip pat gali būti naudojamas atskirti RNR ir baltymus.
Skaitydami gelio elektroforezės rezultatus, mokslininkai gali nustatyti mėginio sruogų dydį. Norint suprasti, kaip vyksta procesas, pirmiausia reikia išmokti elektroforezės gelio apibrėžimą.
Gelio elektroforezės apibrėžimas
Gelio elektroforezė yra galingas įrankis, naudojamas molekulinė biologija nustatyti DNR, RNR ir baltymų dydį ir elektrinį krūvį. Pradėsite naudoti DNR gabalus, kuriuos fermentai suvirškino iš didesnės DNR grandinės.
Naudodami gelio elektroforezės juostos intensyvumą kaip savo rezultatus galite išsiaiškinti, koks yra fragmentų dydis. Tada galima gauti a DNR pirštų atspaudai.
Kaip atskleidžia „elektro“ žodžio dalis, a gelio elektroforezės apibrėžimas reiškia elektrinio lauko naudojimą. Naudojama speciali mašina, kurioje yra buferinis tirpalas, padengiantis elektrodus, šulinys, skirtas geliui suspenduoti viduje, ir patys elektrodai.
Gelis elektroforezėje
Gelio elektroforezė reikia naudoti gelį, suformuotą plokšte, paprastai pagamintą iš išgryninto agaro iš jūros dumblių, vadinamo agaroze, versijos.
Agarozės geliai padaryti poringą matricą, per kurią įvairaus dydžio įkrautos molekulės gali keliauti skirtingu greičiu. Prieš pilant į formą, į gelio tirpalą pridedama cheminė medžiaga, vadinama etidžio bromidu (EtBr).
Jei turite labai mažas DNR ar baltymų molekules atskirti, gali tekti naudoti a poliakrilamido gelis vietoj agarozės. Atkreipkite dėmesį, kai naudojate poliakrilamidą, nes jis yra neurotoksiškas.
Į agarozės gelio formą dedamos specialios šukos, o po to, kai ji sukietėja, atsargiai nuimkite. Čia dedamas DNR fragmentas ar kiti molekuliniai mėginiai, kurie pirmiausia buvo sumaišyti su specialiais pakraunamaisiais dažais. The pakrovimo dažai yra tik sekti DNR judėjimą, nes kitaip nematyti.
Taip pat yra šulinys, kuriame yra tai, kas vadinama a DNR kopėčios ar žymeklis. Tai naudojamas kaip aukštos kokybės šablonas su žinomais juostos dydžiais, kad būtų galima palyginti dydį su tiriamais DNR mėginiais. Pritaikius elektrinį lauką, šios neigiamai įkrautos molekulės keliaus per gelį link teigiamo galo.
Gelio elektroforezės rezultatai
Kai molekulės nukeliauja iki gelio galo, atėjo laikas skaityti gelio elektroforezės rezultatai. Gelyje esantys EtBr dažai lengvai prisijungia prie DNR, todėl jie naudojami, ir tada galite pamatyti DNR juostas fluorescuojančias UV šviesoje.
Turite būti labai atsargūs, kad neliestumėte etidžio bromido, nes jo giminingumas DNR taip pat reiškia, kad jis gali jį atsukti; todėl jis laikomas mutagenu. Dabar yra naujesnių, saugesnių dažiklių, nors jų kainų taškai yra didesni.
UV spinduliai atskleidžia DNR ar kitų molekulinių mėginių gelio elektroforezės juostos intensyvumą. Juostų vieta ant gelio atskleidžia juostos dydį DNR fragmentas. The gelio elektroforezės juostos intensyvumas atskleidžia molekulės koncentraciją.
Dabar galite palyginti savo mėginiuose esančias DNR juostas su DNR kopėčių mėginiais. Žinomi kopėčių juostų dydžiai padės nustatyti santykinį tiriamos DNR dydį.
Kokybiškos gelinės elektroforezės svarba
Gelio elektroforezė buvo naudojama DNR pirštų atspaudai ir kriminalistika. Tai padėjo tyrėjams nustatyti informaciją apie daugelio rūšių genomus. Šių svarbių sričių naudojimas yra aukštos kokybės gelio elektroforezės rezultatas.
Todėl labai svarbu dirbti su aukštos kokybės ingredientais ir būti labai atsargiems gaminant gelius. Būtina užkirsti kelią DNR mėginių užteršimui RNR ar baltymais.
Būtinai naudokite švarų buferį, atsargiai supilkite gelį, kad jo šukų šuliniai būtų tolygiai suformuoti, ir palaikykite visus reagentus tinkamoje temperatūroje. Gelio elektroforezė juostos intensyvumas turėtų būti gyvybingas ir švarus, fone neturi būti jokių kitų DNR pėdsakų, o gelį teršiantys RNR ar baltymų tepinėliai.
