Jūsų mokytojas įteikia jums bakterijų mėginį ir klausia: kiek gyvybingų mikroorganizmų yra šiame mėginyje? Ką tai reiškia ir kaip jūs tai suprantate? Viena iš būdų yra surasti skaičių kolonijas formuojantys vienetai(CFU).
Kas yra CFU?
CFU nurodo atskirų bet kokių mikroorganizmų kolonijų, kurios auga ant terpės plokštelės, skaičių. Ši vertė savo ruožtu rodo bakterijų, galinčių daugintis, skaičių, nes plokštelėje susidarė kolonijos. Yra CFU formulė, kuri apima mėginių ėmimą.
Kaip rasti CFU?
Skaičiuoti bakterijų skaičių skystame mėginyje yra labai sunku. Jų yra per daug, ir jie yra per maži. Be to, kai kurie iš jų gali būti mirę, o kiti gyvi, o mirusieji neturėtų būti skaičiuojami į bendrą sumą. Jus domina tik perspektyvus bakterijos arba bakterijos, kurios gali daugintis. Taigi, kaip jūs galite sužinoti, kiek jūs turite bakterijų?
Lygiai taip pat, kaip galite surengti 1000 žmonių apklausą ir pritaikyti ją 10 000 žmonių, kad sužinotumėte, kaip jie galėtų galvoti apie tam tikrą temą. Galite pabandyti paimti nedidelę dalį originalaus mėginio, išsiaiškinti, kiek yra bakterijų tą dalį ir paskaičiuokite, kad apytiksliai nustatytumėte, kiek jų galėjo būti originale pavyzdys.
Skiedimų naudojimas norint rasti CFU
Tam tikro mėginio CFU nustatymo procedūra apima visų pirma to mėginio atskiedimą. Praskiedimai paskleidžiami ant plokštelių su tinkama auginimo terpe. Keli praskiedimai dažnai yra gera idėja, nes pradinis mėginys gali būti labai koncentruotas.
Leidę bakterijoms ant plokštelių augti tam tikrą laiką, atskiros kolonijos yra suskaičiuoti ant plokštelės. Jei mėginys buvo per koncentruotas, vietoj atskirų kolonijų pamatysite didelį plotą, padengtą bakterijų augimu, kuris vadinamas a veja. Tai reiškia, kad turėtumėte toliau praskiesti mėginį ir bandyti auginti dar kartą, kad pamatytumėte atskiras kolonijas.
Kadangi atskiros kolonijos yra iš vienos bakterijos, kuri dauginasi daug kartų, tik šios yra įskaitytos į CFU.
Eksperimentinė CFU nustatymo procedūra
Skiedimų naudojimo CFU skaičiavimui pavyzdys galėtų būti toks: Pirma, iš pradinio pavyzdžio, kurį jums pateikia mokytojas, paimkite 1 ml ir padėkite jį plokštele. Kitą dieną pamatai, kad yra bakterijų veja. Tai reiškia, kad jūs negalite suskaičiuoti CFU skaičiaus. Kitas žingsnis yra šiek tiek praskiesti.
Pirmiausia paimkite 1 ml mėginio ir atskieskite jį 9 ml skystos terpės. Kadangi praskiedimas yra viena mėginio dalis iki devynių skiediklio dalių, jis vadinamas praskiedimu 1:10. Tada paimkite 1 ml praskiedimo 1:10 ir įpilkite to į 9 ml skystos terpės. Šis praskiedimas yra praskiedimas 1: 100. Galiausiai praskiedžiate 1: 1 000 praskiedę 1 ml praskiedimo 1: 100 ir pridedant 9 ml skystos terpės. Kiekvienam praskiedimui dabar turite 10 ml praskiestos bakterijų kultūros.
Praskiedimai padaryti, ant lėkščių padėkite 0,5 ml praskiedimų. Būtinai pažymėkite plokšteles, kuriomis padengtas praskiedimas.
Kitą dieną grįšite ir pamatysite, kad ant visų plokščių yra keletas atskirų kolonijų. Jūs norite pasirinkti lėkštę tarp 30 ir 300 kolonijų. Matote, kad skiedimo plokštelėje 1: 1 000 yra apie 10 kolonijų, tai reiškia, kad mėginį per praskiestumėte. Ta plokštelė nebus naudinga ieškant CFU.
Skiedimo plokštelėje 1:10 yra daug kolonijų, galbūt daugiau nei 300. Tokiu atveju galite pereiti ant plokštelės 1: 100. Suskaičiuojate kolonijas šioje plokštelėje ir pastebite, kad joje yra 179 kolonijos. Tai reiškia, kad 0,5 ml praskiedimo 1: 100 yra 179 CFU. Bet kaip su originaliu pavyzdžiu?
Kas yra CFU skaičiavimas?
Dabar, kai turite šiek tiek duomenų, galite atlikti CFU skaičiavimą pradiniame pavyzdyje.
1. Paimkite padengtą kiekį (0,5 ml) ir padauginkite iš praskiedimo koeficiento (0,01), kad gautumėte 0,005. Privalote tai padaryti norėdami rasti praskiedimo koeficientą, kuris suteikė jūsų CFU skaičių. Čia pusė mililitro praskiedimo 1: 100 leido suskaičiuoti CFU.
2. Padalinkite CFU iš praskiedimo (179) iš 1 veiksmo rezultato (0,005), kad gautumėte 35 800 CFU.
Tai reiškia, kad pradiniame 1 ml praskiesto mėginio sudėtyje yra 35 800 CFU. Kitas būdas tai pasakyti yra tai, kad pradiniame mėginyje yra 35 800 CFU / ml.
CFU yra puikus įrankis norint sužinoti, kiek bakterijų, grybų ar bet kokių mikroorganizmų yra tam tikrame mėginyje. Čia aprašytas dengimo metodas yra ypač naudingas labai koncentruotiems mėginiams ar organizmams, kurie skystoje kultūroje blogai auga.