Bakterijos auginamos Petri lėkštelėse ant kietos terpės, vadinamos bakterijų agaru, kur susidaro iškilios, apskritos kolonijos. Skirtingai nuo atskiros bakterijų ląstelės, kolonija yra pakankamai didelė bakterijų grupė, kad būtų matoma plika akimi. Bakterijų augimą galima išmatuoti paprasčiausiai stebint, kiek kolonijų yra; tačiau kiekybiškesni metodai apima skaičiavimo kameros naudojimą arba dažniau gyvybingų plokštelių skaičiavimą. Pastarasis naudojamas dažniausiai, nes jame taip pat pateikiama kokybinė informacija, pvz., Įvairių augimo sąlygų poveikis. Kadangi Petri lėkštelėje gali būti milijardai bakterijų, pirmiausia reikia praskiesti mėginį, kad būtų galima suskaičiuoti kolonijų skaičių.
Į mėgintuvėlį į 90 mikrolitrų praskiedimo terpės įpilkite 10 mikrolitrų pradinės bakterijų kultūros. Tvirtai uždarykite mėgintuvėlio dangtį ir švelniai sūkuriuokite, kad gautumėte homogenišką mišinį. Dabar mėginys yra dešimtadalis pradinės koncentracijos.
10 mikrolitrų šio naujo mėginio perpilkite į naują mėgintuvėlį, kuriame yra 90 mikrolitrų skiedimo terpės, vėl sumaišykite. Vėlgi rezultatas bus toliau praskiestas mėginys - dabar jis bus viena šimtoji jo pradinės koncentracijos. Tai kartokite keletą kartų, kol pradinis mėginys bus praskiestas tarp 10
4 ir 1010 laikai. Įsitikinkite, kad kiekvienas mėgintuvėlis yra tinkamai praskiedžiamas, pvz., 10-1, 10-2 ir taip toliau.Paskirstykite 10 mikrolitrų paskutinio praskiedimo ant agaro plokštelės. Naudodamiesi plintančiu kraštu, paskirstykite bakterijų tirpalą visame agaro plokštelės paviršiuje. Pakartokite tai dar dviem plokštelėms. Taip pat įprasta atlikti šiuos veiksmus palyginimui naudojant kitus skiedimo lygius. Būtinai pažymėkite plokščių dugnus. Uždėkite kiekvienos plokštelės dangčius ir leiskite agaro plokštelėms kelias minutes išdžiūti laboratorijos stende po liepsna arba inkubatoriuje. Plokštelės dedamos į inkubatorių, kuris turi būti nustatytas iki bakterijų padermės temperatūros. Palikite augti 12–16 valandų.
Kolonijos turėtų būti matomos po 16 valandų; tačiau kai kurioms genetinėms modifikacijoms gali prireikti ilgiau (pavyzdžiui, spalvos vystymasis). Kai kolonijas galima pastebėti, išimkite plokštes ir raskite tas, kuriose yra nuo 30 iki 300 kolonijų. Nuolatiniu žymekliu uždėkite tašką ant petri lėkštelės dugno - šono su agaru, o ne dangtelio - visur, kur per agarą matoma kolonija. Suskaičiuokite kiekvieną žymeklio tašką. Pakartokite kiekvieną patiekalą.
Norint išmatuoti bakterijų kiekį pradiniame šio eksperimento pasėlyje, skiedimą reikia pakeisti dviem skaičiavimais. Pirma, kai paėmėte vieną mikrolitrą iš mėgintuvėlio įdėti į Petri lėkštelę, paėmėte dešimtadalį praskiesto mėginio, todėl viską turite padauginti iš 10, kad tai pakeistumėte. Be to, jei skiedimo koeficientas mėgintuvėlyje buvo, pavyzdžiui, 10-7, tada kolonijų skaičius turi būti padaugintas iš 107 skiedimo efektą. Skaičiavimuose tiesiog pašalinkite neigiamą ženklą iš rodiklio. Naudokite formulę:
[Suskaičiuotų kolonijų skaičius] × 10 × [kiek kartų mėginys turi būti padaugintas, kad gautumėte pradinę koncentraciją: pavyzdžiui, 105] = Kolonijas sudarančių vienetų (CFU) skaičius viename mililitre pradinės kultūros. Tai yra bakterijų augimas jūsų petri lėkštelėse.
