Kai išbandote pH poveikį fermentų aktyvumui, turėtumėte keisti pH. Tačiau tai galite padaryti gerais ar blogais būdais. Turėkite omenyje, kokie papildomi veiksniai gali sujaukti skirtingo pH poveikį. Priešingu atveju gautus rezultatus gali lemti ne pH pasikeitimas, o koks nors kitas veiksnys. Žinojimas, kaip tinkamai keisti pH ir kokie veiksniai sujaukia eksperimento pH, padės pasiekti gerų rezultatų ir suprasti, kodėl jūsų rezultatai gali būti ne tokie, kokių tikėjotės.
Pakeiskite tik vieną dalyką
Testuodami pH poveikį fermentų aktyvumui, keiskite tik pH, išlaikydami pastovius kitus veiksnius. Šie kiti veiksniai apima fermentų koncentraciją, substrato koncentraciją ir temperatūrą. Veiksniai, kurie išlieka pastovūs, vadinami kontroliniais kintamaisiais. Kontroliniai kintamieji leidžia daryti išvadą, kad fermento aktyvumo rezultatus, gautus atliekant eksperimentą, lemia kintantis pH, nepriklausomas kintamasis. Žinoti, kokių veiksnių eksperimente nekeisti, taip pat svarbu, kaip žinoti, kokį veiksnį keisti, kitaip bus sunku padaryti išvadą, ar rezultatus iš tikrųjų lėmė vienas dalykas išbandyta.
Pasirinkite vieną rūgštį arba vieną pagrindą
Tirpalo pH galima pakeisti ištirpinant skirtingus rūgšties ar bazės kiekius vandenyje. Vienas iš būdų išbandyti pH poveikį fermentų aktyvumui yra palaipsniui įlašinti stiprios rūgšties ar stiprios bazės lašų į tirpalą, kuriame yra fermento, ir tada stebėkite tašką, kuriame fermento veikla sulėtėja arba sustoja. Rūgštis apibrėžiama kaip junginys, dovanojantis vandenilio joną, vadinamas protonu (H +), o bazė - junginiu, kuris dovanoja hidroksido joną (-OH). Skirtingos rūgštys ir bazės turi skirtingą protonų ar hidroksido jonų kiekį, kurį reikia atiduoti. Ne visi protonai ar hidroksido jonai yra nedelsiant paaukojami, kai į tirpalą įpilama rūgšties ar bazės, tačiau paaukotų protonų ar hidroksido jonų skaičius keičia pH skirtingu greičiu. Taigi, atliekant fermentų tyrimą, verta keisti pH, naudojant tik vienos rūšies rūgštį arba vienos rūšies bazę. Priešingu atveju netyčia pridedami kiti kintamieji.
Audiniai taip pat keičia pH
Kai kurie laboratoriniai eksperimentai, kuriuose tiriamas fermentų aktyvumas, apima šlifuojant šviežią audinį, kad fermentai išsiskirtų iš ląstelių, o tada pridedant substrato, kad būtų galima išmatuoti fermento aktyvumą. Šviežiame audinyje yra kraujo. Dėl to, kad kraujyje yra fermentų, kurie kraujyje ištirpusias anglies dioksido dujas keičia anglies rūgštimi, pats audinys gali paveikti pH. Taigi atliekant eksperimentus, kuriuose atliekamas fermentų aktyvumas šviežiame audinyje, prieš šlifuojant audinį naudinga nuplauti kraują stiklinėje su šaltu vandeniu. Tai sumažins nenumatytą audinio sukeliamą pH pokytį, kad būtų galima ištirti tikslingą pH pokytį.
Dydžiai turi būti tokie patys
Kaip aptarta aukščiau, fermentų koncentracija yra kontrolinis faktorius, kurio nereikėtų keisti, kai tikrinamas pH poveikis fermentų aktyvumui. Tačiau eksperimentinės procedūros iš esmės subtiliai keičia fermentų koncentraciją. Jei naudojamas grynas fermentų tirpalas, fermentų koncentracija turi būti pastovi. Tačiau atliekant eksperimentus, kurių fermentas yra iš šviežio audinio, pavyzdžiui, bulvių gabalėlių, augalų ar kepenų gabalėlių, gabalėlių dydis keičia fermento kiekį kiekviename mėgintuvėlyje. Taigi bus naudinga kuo tolygiau supjaustyti audinio gabalėlius. Tai dar vienas pavyzdys, kaip žinojimas, ko negalima keisti ir kodėl sunku nevengti visiškai pokyčių, padeda interpretuoti įvairaus faktoriaus, pavyzdžiui, pH, rezultatus.