DNA
데 옥시 리보 핵산과 단백질. DNA는 유전자라는 단위로 구성되며 각 단위는 특정 RNA 또는 단백질 서열을 암호화합니다. 유전자는 생물학적 구조와 기능, 진화, 질병 및 기타 살아있는 시스템의 여러 측면에 대해 배우기 위해 연구됩니다. 유전자를 자세히 연구하려면 관심있는 세포에서 DNA를 분리하고 정제해야합니다.
DNA 추출
단일 세포에서 DNA를 추출하여 연구 할 수는 있지만 육안으로 보는 것만으로는 충분하지 않습니다. 스풀링에 충분한 양을 얻으려면 셀이 많을수록 더 나은 (수백만) 작업해야합니다.
정확한 프로토콜은 특정 샘플의 고유 한 특성을 설명하기 위해 상당히 다양하지만 일반적인 단계는 균질화, 용해, 분해, 분리 및 수집입니다. 절차는 작은 (샘플 크기에 따라 다름) 유리 또는 플라스틱 튜브에서 가장 잘 수행됩니다.
샘플은 일반적으로 혼합되거나 분쇄되어 세포를 서로 완전히 분리합니다. 이렇게하면 세포 성분이 다음 시약에 더 쉽게 접근 할 수 있습니다. 그런 다음 세제 또는 효소를 균질 액에 첨가하여 세포막 (세포가 진핵 세포 인 경우 핵막)을 용해시켜 DNA를 제거합니다. 이 시점에서 DNA는 단백질, 지질, 탄수화물, 세포에 포함 된 모든 것들로 둘러싸여 있습니다.
단백질을 분해하기 위해 추가 효소 소화가 필요할 수 있으므로 DNA에 결합하여 수집을 방해하지 않습니다. DNA는 차가운, 순수, 에틸 또는 이소 프로필 알코올을 첨가하여 나머지 세포 내용물과 분리됩니다. DNA는 이러한 알코올에 용해되지 않으므로 응축되어 알코올과의 접촉을 최소화합니다. 응축 된 DNA는 일반적으로 원심 분리 또는 스풀링에 의해 수집됩니다.
DNA 스풀링
스풀링에 의한 DNA 수집은 추출 과정에서 다량의 DNA를 얻을 때 효과적입니다. 순수한 DNA의 인상적인 얽힘이 선명하게 보이기 때문에 훌륭한 시연 방법이기도합니다.
DNA를 스풀링하려면 분리 단계를 신중하게 수행해야합니다. 이전에 첨가 한 용해 시약 혼합물의 일부가 아닌 경우 알코올 첨가 단계 전에 농축 된 소금 용액 (염화나트륨)을 용액에 첨가해야합니다. 차가운 알코올을 시험관 측면에 천천히 부어 수용액 위에 층을 형성하고 혼합을 피합니다. 올바르게 수행하면 알코올이 짠 층 위에 자체 층을 형성합니다. 그런 다음 스풀링 이옵니다.
짠 층에서 DNA를 수집하려면 튜브 바닥에 닿을 때까지 알코올 층을 통해 유리 교반 막대를 조심스럽게 놓습니다. 두 층 사이의 경계면을 보면서 손가락 사이의 막대를 천천히 돌립니다. 충분한 DNA가 존재하면 층 사이의 경계면에서 함께 응집하여 유백색 반투명 덩어리를 형성합니다. 막대를 돌려 DNA를 감싸고 (즉, 스풀링 부분) 튜브에서 빼냅니다. DNA는 저장 또는 추가 분석을 위해 다른 순수 알코올 튜브로 옮길 수 있습니다.
