분자 생물학에서 다양한 DNA 분리 단계를위한 좋은 버퍼 선택 및 준비가 가능합니다. 단백질 발현으로 이동하는 것과 시작하기 위해 다른 맥시 준비 키트를 여는 것의 차이 위에. 중요한 중요성에도 불구하고, 버퍼 레시피는 종종 다른 구성 요소에 대한 설명이나 근거없이 작성된 레시피입니다. 이러한 버퍼 중 하나는 포도당-트리스 -EDTA 또는 GTE 버퍼입니다.
GTE는 무엇에 사용됩니까?
GTE는 세포를 용해 (개방)하고 내부의 플라스미드 DNA를 수확하기 전에 박테리아 세포 펠릿을 재현 탁하는 데 사용됩니다. 세포막을 부드럽게하는 리소자임은 종종 GTE 버퍼와 함께 추가됩니다. 이 단계에서 전체 세포의 균질 한 현탁액을 달성하여 이후에 추가 된 용해 용액이 모든 세포에 도달 할 수 있도록하는 것이 좋은 DNA 수율을 얻는 데 중요합니다. GTE는 DNA에 안정적인 환경을 제공하면서이를 수행하도록 설계되었습니다.
삼투압에 대한 포도당
50mM (밀리몰) 포도당 당이 GTE 버퍼에 첨가되어 세포 외부의 용질 농도가 세포 내부의 농도와 가까운 삼투압을 유지합니다. 이것은 응집 및 분해로 인해 DNA 수율을 낮출 수있는 조기 세포 용해를 방지합니다. 완충액의 다른 성분도 용액의 삼투압에 기여하지만 포도당, 전해질이 아닌 것은 용액의 완충액을 방해하지 않기 때문에 좋은 선택입니다. 속성.
pH 안정성을위한 Tris
Tris는 매우 일반적인 pH 버퍼 인 tris (hydroxymethyl) aminomethane의 약칭입니다. GTE 완충액의 경우 산성염 (Tris-HCl)을 25mM 농도로 완충액에 첨가합니다. 이는 플라스미드 DNA의 산 가수 분해 (분해) 및 다른 세포 성분의 원치 않는 부반응을 방지하는 데 이상적인 pH 인 거의 생리학적인 8.0으로 용액의 pH를 유지합니다.
EDTA는 DNA 분해를 방지합니다
EDTA 또는 ethylenediaminetetraacetic acid는 용액에서 금속 이온을 포착하거나 "킬레이트 화"하여 원하지 않는 부반응에 참여하는 것을 방지합니다. GTE 버퍼에서 EDTA는 10mM에 추가됩니다. 주요 목적은 유리 아연, 마그네슘 및 칼슘을 반올림하여 해당 금속을 필요로하는 특정 경로에 의한 DNA 분해를 방지하는 버퍼입니다.
몇 가지 중요한 팁
GTE 버퍼를 차갑게 유지하고 소량으로 만들어 의도하지 않은 박테리아의 증식을 방지하십시오. 설탕과 조절 된 pH는 훌륭한 성장 배지를 만듭니다. 항상 정제수를 사용하십시오. 수돗물은 파이프에서 과도한 금속 이온을 함유 할 수 있으며, 이는 EDTA가 포획하는 능력을 압도 할 수 있습니다. 샘플에 간섭 RNA가있는 것으로 의심되는 경우 밀리 리터당 100 마이크로 그램의 RNase A를 GTE 버퍼에 추가하여 문제를 제거하십시오.
