Tris 또는 tris (hydroxymethyl) aminomethane은 DNA 추출 과정 전반에 걸쳐 사용되는 일반적인 생물학적 완충액입니다. 여러 소스에서 추출하는 동안 DNA는 pH에 민감합니다. 세포 용해, 원하지 않는 세포 성분 제거 및 침전 동안 tris는 안정적인 pH를 유지하는 데 사용됩니다. 또한 세포 용해에서 특히 중요한 역할을합니다.
TL; DR (너무 김; 읽지 않음)
DNA 추출은 pH에 민감한 프로세스이며 tris 버퍼를 사용하면 세포 용해 및 추출에 대해 pH를 안정적으로 유지하는 데 도움이됩니다.
버퍼로서의 Tris
pH는 여러 세포 요인에 영향을주고 영향을받을 수 있으므로 안정적인 pH를 유지하는 것은 실험 과학에 필수적입니다. tris와 같은 생물학적 완충액은 pH를 바꿀 수있는 영향에도 불구하고 안정적인 pH를 유지할 수 있기 때문에 중요합니다. pKa가 8.1 인 Tris (hydroxymethyl) aminomethane은 pH 7과 9 사이의 효과적인 완충액입니다. 중성 범위 때문에 tris는 생물학 실험실에서 일반적으로 사용되는 완충액입니다. 그러나 트리스 버퍼는 온도에 민감하므로 부정확성을 방지하기 위해 원래 pH가 적용된 온도에서 사용해야합니다.
세포 용해
용해 또는 세포를 부수는 것은 DNA 추출의 첫 번째 단계입니다. 이것은 tris 및 EDTA (ethylenediaminetetraacetic acid)를 포함하는 완충액에 의해 수행됩니다. EDTA는 칼슘 및 마그네슘과 같은 2가 양이온과 결합합니다. 이러한 이온은 세포막의 무결성을 유지하는 데 도움이되므로 EDTA로 이온을 제거하면 막이 불안정 해집니다. Tris는 주요 버퍼링 구성 요소입니다. 주요 역할은 완충액의 pH를 안정된 지점 (일반적으로 8.0)으로 유지하는 것입니다. 또한 tris 막의 LPS (지질 다당류)와 상호 작용하여 막을 불안정하게 만듭니다. 더욱이.
Tris는 pH 변화로부터 DNA를 보호합니다
세포가 분리되면 DNA와 내용물이 완충액으로 흘러 들어갑니다. 또한, RNase A (RNA 파괴), 프로테아제 (단백질 파괴) 및 SDS (소듐 도데 실 설페이트, 막 조각을 용해 함)가 종종 포함됩니다. 종합하면, 세포 내용물과 단편화 된 RNA 및 단백질의 수프는 용액의 pH에 큰 영향을 미칠 수 있습니다. DNA는 pH에 민감하기 때문에 tris가 수프를 완충하고 pH를 안정된 지점으로 유지하는 것이 중요합니다.
DNA 침전
DNA 추출의 마지막 단계에서는 용액에서 DNA 자체가 추출됩니다. 이 시점에서 DNA는 버퍼에 용해됩니다. 용액에서 추출하기 위해 에탄올 또는 이소프로판올 (이소 프로필 알코올)을 첨가하여 DNA를 불용성으로 만듭니다. 이것이 완료되면 DNA는 용액에서 흰색 실질 물질로 분명해집니다. 이러한 방식으로 DNA가 나머지 세포 구성 요소에서 분리 될 수 있지만 불용성 인 경우 "사용할 수 없습니다". 분리 후 알코올은 제거되고 DNA는 tris와 같은 생물학적 완충액으로 반환되어야 사용됩니다.
너 스스로해라
DNA 추출은 일반적으로 여러 실험실 중 하나를 사용하여 일반적으로 연구 실험실에서 수행되지만 시중에서 판매되는 키트로 누구나 가정에서 일반 가정 용품과 녹색을 사용하여 DNA 추출을 할 수 있습니다 완두콩 또는 시금치. 이 경우, pH 변화로부터 DNA를 보호하기 위해 tris 또는 생물학적 버퍼가 존재하지 않습니다. 그러나 이것은 학생들이 세포 DNA와 연결되도록 돕는 시각적 인 방법입니다.
