고성능 액체 크로마토 그래피 (HPLC)로 작업 할 때 신뢰할 수있는 고품질 결과를 보장하려면 좋은 보정이 절대적으로 필요합니다. HPLC 기기의 적절한 보정은 적절한 보정 표준을 만드는 것으로 시작됩니다. 대부분의 경우, 교정은 실제로 교정 곡선으로 알려진 것을 생성하기 위해 농도를 증가시키는 일련의 표준을 요구합니다. 이것은 시험 대상 화학 물질의 농도와 HPLC 검출기의 반응 사이의 관계를 설명하는 플롯 된 선과 관련 방정식입니다.
HPLC ( "분석 물")를 사용하여 테스트 할 화학 물질을 결정합니다. 예를 들어, 과당 함량에 대해 일련의 청량 음료를 테스트 할 수 있습니다.이 경우 과당이 분석 물질이됩니다.
적절한 순도의 분석 화학 물질의 양을 얻습니다. 일반적으로 순도는 99 % 이상이어야하며 분석 물질은 평판이 좋은 화학 공급 업체에서 구입해야합니다. 예를 들어 과당의 경우 식료품 점이 아닌 화학 공급 업체에서 순수 과당을 구입합니다.
HPLC에서 테스트하려는 샘플에서 분석 물의 최대 및 최소 예상 농도를 결정합니다. 청량 음료의 경우 음료의 라벨을 검토하고 테스트 할 음료 중 가장 낮은 과당 함량을 결정합니다. 초기 샘플 (청량 음료)은 분석 준비 과정에서 희석되거나 조작 될 수 있습니다. (사용되는 HPLC 방법에 따라 다름) 따라서 HPLC에 실제로 주입되는 시료의 분석 물질 농도는 수정되었습니다. 고려해야 할 것은 HPLC에서 실행되는 시료의 분석 물질 농도입니다.
보정 표준을 구성하기 위해 분석 물을 용해시킬 용매를 결정합니다. 이 용매는 상대적으로 광범위한 농도 (최소한 테스트하려는 샘플의 높은 농도)에서 분석 물을 적절하게 용해 할 수 있어야합니다. 또한이 용매는 이상적으로는 HPLC 기기를 통해 샘플을 운반하는 데 사용되는 용매 인 "이동상"과 매우 유사해야합니다.
분석 물질의 "표준 표준"용액을 만드는 데 필요한 분석 물질의 양을 계산합니다. 이것은 스톡 표준의 필요한 농도에 원하는 부피를 곱하여 찾을 수 있습니다. 이 용액의 분석 물질 농도는 예상되는 가장 높은 샘플 농도보다 최소 10 % 높아야합니다. 청량 음료 샘플에서 예상되는 가장 높은 과당 농도가 8g / 100 밀리리터 인 경우 표준 표준은 10g 과당 / 100 밀리리터의 농도로 만들 수 있습니다. 합리적인 부피는 500 밀리리터이므로 8/100 mL x 500 mL = 40g 과당이 필요합니다.
적절한 수준의 정밀도로 필요한 분석 물질의 양을 측정합니다. 종종 소수점 하나 또는 두 자리까지 정확한 그램 단위의 중량 값이 적합하지만 일부 방법에는 더 많은 정밀도가 필요할 수 있습니다.
계량 된 분석 물을 필요한 부피의 부피 플라스크로 옮기고 플라스크의 채우기 표시에 원하는 용매를 추가합니다. (예를 들어 눈금이있는 비커 대신) 부피 플라스크를 사용하면 표준 농도 값의 정밀도가 높아집니다. 모든 분석 물이 플라스크로 옮겨 졌는지 확인하십시오. 필요한 경우 일부 용제를 사용하여 세척하십시오.
정확한 전달을 위해 피펫을 사용하여 저장 표준의 알려진 부피를 부피 플라스크로 옮기고 용매를 추가하여 일련의 다양한 표준 표준 희석을 만듭니다. 최저 표준 농도는 분석 할 최저 예상 샘플보다 낮아야합니다. 청량 음료의 경우, 샘플에서 예상되는 최저 과당 농도가 2g / 100mL이면 1g / 100mL 표준을 만들 수 있습니다. 이것은 표준 표준의 10 배 희석에 의해 만들어집니다. 표준 시리즈에는 총 5 개 또는 6 개의 농도가 포함되어야하므로 3, 5 및 8g 과당 / mL의 표준 물질을 생성하려면 추가 희석이 필요합니다. 이제 HPLC를 보정하는 데 사용할 일련의 표준 솔루션이 있습니다.