용해 버퍼의 구성 요소

Lyse는 그리스어에서 유래 한 단어로 단순히 "분할하다"또는 "파열하다"를 의미합니다. 용해 완충액의 세포에 일어나는 일과 관련이 있습니다. 내용. 과학자들은 특히 박테리아의 경우 분석을 위해 세포에서 DNA 또는 단백질을 추출 할 때 용해 완충액을 사용합니다. 세포 용해 버퍼의 유형은 실험의 종류에 따라 다르지만 다음은 몇 가지 일반적인 선택입니다.

TL; DR (너무 긴; 읽지 않음)

Lysis 버퍼는 열린 세포를 깨는 데 도움이되므로 그 내용에 액세스하거나 제거 할 수 있습니다. 일부 예에는 염, 세제, 킬레이트 제 및 억제제, 일부 알칼리성 화학 물질이 포함됩니다.

완충액은 세포가 분열하는 동안 pH를 안정화시킵니다. Tris-HCL은 pH 8에서 버퍼링을위한 가장 일반적인 화학 물질 중 하나입니다. HEPES는 이러한 실험에서 또 다른 일반적인 완충 화학 물질입니다. 염화나트륨 염은 또한 이온 강도, 세포 외부 용질의 총 농도를 높일 수 있습니다. 이 마지막 점은 물이 낮은 용질 농도의 영역에서 높은 용질 농도의 영역으로 세포막을 통해 확산 될 수 있기 때문에 약간 중요합니다.

세제는 세포막을 용해시켜 세포의 내용물이 빠져 나갈 수 있도록합니다. 양친 매성 분자 구조 (즉, 한쪽 끝이 물 분자와 쉽게 상호 작용하는 반면 다른 소수성 또는 "물을 두려워하는"쪽 끝은 그렇지 않은 분자). 세제 분자의 소수성 꼬리가 지방 분자를 향해 안쪽을 향하는 작은 클러스터 인 미셀을 형성하여 지방을 용해시킬 수 있습니다. 일반적인 세제에는 나트륨 도데 실 설페이트 또는 SDS, NP-40 및 tritonX가 포함됩니다.

용해 완충액은 일반적으로 에틸렌 디아민 테트라 아세트산 (EDTA) 또는 에틸렌 글리콜 테트라 아세트산 (EGTA)과 같은 킬레이트 제를 포함합니다. 이러한 화학 물질은 두 개의 양전하 (예: 마그네슘 및 칼슘)로 금속 이온에 결합하여 다른 반응에는 사용할 수 없습니다. 많은 DNA (DNA를 씹는 단백질)와 프로테아제 (다른 단백질을 분리하는 단백질)에는 마그네슘 이온이 필요합니다. 따라서 EDTA와 EGTA는 이러한 주요 성분을 제거함으로써 프로테아제 또는 DNAse 수준을 낮추는 데 도움이됩니다. 활동. 그러나 그들은 그것을 완전히 배제하지 않으며 일부 프로테아제는 마그네슘 보조 인자에 의존하지 않으므로 용해 완충액 때로는 프로테아제에 결합하여 기능을 방해하는 프로테아제 억제제라고하는 화학 물질도 포함됩니다. 정확히.

박테리아에서 플라스미드를 정제하는 매우 일반적인 기술인 알칼리 용해에는 세 가지 용액이 포함됩니다. 첫 번째는 포도당, tris-HCL 버퍼, EDTA 및 RNAses를 포함합니다. 포도당은 박테리아 외부에 높은 용질 농도를 생성하여 약간 연 약해져 용해가 더 쉽습니다. EDTA와 tris-HCL은 이미 설명한대로 기능하는 반면, RNAse는 세포 내부의 RNA를 씹어 서 방해를받습니다. 두 번째 솔루션은 실제로 세포를 용해합니다. 여기에는 SDS 세제와 NaOH가 포함되어 pH를 12 이상으로 높이고 세포 내부의 단백질을 변성시켜 DNA를 단일 가닥으로 분리합니다. 세 번째 용액에는 칼륨 아세테이트가 포함되어 pH를보다 중성 수준으로 복원하여 플라스미드 DNA 가닥이 다시 결합 될 수 있습니다. 그 동안 변성 된 단백질이 응집되어 침전되고 도데 실-황산염 이온이 칼륨 이온과 함께 용액에서 침전되는 불용성 화합물을 형성합니다.