ლარის ელექტროფორეზის ლაბორატორიის პროცედურები

გელი ელექტროფორეზი არის მეთოდი, რომელიც ლაბორატორიებში გამოიყენება დნმ – ის ძაფების გაზომვისა და დასალაგებლად. ეს აუცილებელია, რადგან ნორმალურ პირობებში დნმ ძალიან მცირეა მანიპულირებისთვის, მაშინაც კი, როდესაც ნახულობენ უმეტეს მიკროსკოპების გამოყენებით. გელის ელექტროფორეზის ლაბორატორია იყენებს შედარებით მარტივ პროცედურას და იგივე ძირითადი ტექნიკის გამოყენება შესაძლებელია ცალკეული ცილების გამოყოფისთვისაც.

გელის ელექტროფორეზის პროცედურის დასაწყებად, ჯერ უნდა შექმნათ გელი. როგორც წესი, გელი მზადდება თხელი ფურცლებით, ნივთიერების გამოყენებით, რომელსაც უწოდებენ აგაროზას. ფხვნილ აგაროზას ათავსებენ კოლბაში, შემდეგ მოსდევს მარილიანი წყლის ხსნარი, რომელსაც ბუფერი ეწოდება. აგაროზისა და ბუფერის ეს ნარევი თბება მანამ, სანამ ორი ნივთიერება არ დნება ერთად, შემდეგ კი გადაისხმება ფორმირების ფორმაში. მოწყობილობა, რომელსაც სავარცხელი ეწოდება, მოთავსებულია ფორმის ერთ ბოლოზე, სანამ გელი გაცივდება. როდესაც გელი გაცივდება, სავარცხელი იხსნება, ტოვებს მცირე ჭრილებს, რომლებიც გამოყენებული იქნება დნმ-ის ნიმუშების დასაკავებლად.

გაგრილებული აგაროზის ნარევის განსაკუთრებული მახასიათებელი (ე.წ. გელი მატრიცა) გამომდინარეობს იქიდან, რომ იგი იქმნება მარილიანი წყლით. ელექტროფიკაციის შემთხვევაში, მატრიცა გამტარი გახდება, რაც საშუალებას მისცემს ელექტროენერგიას მიედინოს მის სიგრძეზე. გელის მატრიცის კიდევ ერთი განსაკუთრებული თვისებაა რეგულარული, მიკროსკოპული ხვრელების არსებობა. ეს ხვრელები საშუალებას მისცემს დნმ – ის ძაფებს გადაადგილდეს გელით მატრიქსში და ხელი შეუწყოს დახარისხების პროცესს.

თქვენი შემდეგი ნაბიჯი არის ელექტროფორეზის პალატის შექმნა. ეს არის პატარა მართკუთხა ყუთი, სადენიანი, რომელსაც აქვს დადებითი და უარყოფითი ელექტრული კავშირი ორივე ბოლოს. კამერები, როგორც წესი, არაღრმაა, საკმარისად მცირე ზომის, რომ მაგიდაზე მოთავსდეს და აშენებულია წმინდა მასალებისგან, როგორიცაა პლექსიგლასი.

მარილის წყლის ხსნარი ჩაედინება ელექტროფორეზის პალატის ფსკერზე, ხოლო გელი მატრიცა ოდნავ ჩაიძირა ამ ხსნარში. მარილიანი წყალი ორ მიზანს ემსახურება: ელექტროენერგიის ნაკადის დახმარება და გელი მატრიქსის ტენიანობის შენარჩუნება. მას შემდეგ, რაც დნმ-ს უარყოფითი მუხტი უბიძგებს, განათავსეთ თქვენი მატრიცა ისე, რომ თქვენი ნიმუშები განთავსდეს თქვენი უარყოფითი ელექტრული კავშირის გვერდით.

შემდეგ მზადდება დნმ-ის ნიმუშები. მას შემდეგ, რაც ხსნარში დნმ-ის დანახვა შეუძლებელია, თითოეულ ინდივიდუალურ ნიმუშს ემატება საღებარი საშუალება, რომელსაც ეწოდება დატვირთვის ბუფერი. ეს აგენტი ასევე ასქელებს დნმ-ის ხსნარს, რაც მას ნაკლებად ადევს და უფრო შრომატევადი ხდება. პიპეტის გამოყენებით, დნმ – ის ხსნარის ნიმუში გადაიტანეთ გელის მატრიქსში თითოეულ მონაცვლე ჭრილში. ცარიელ ჭრილში თითოეულ ნიმუშს შორის მოათავსეთ დნმ-ის რამდენიმე ხსნარი, რომლის სიგრძე უკვე იცით (ე.წ. დნმ სტანდარტი) ექსპერიმენტის კონტროლისა და შედარებისთვის.

ახლა, ჩართეთ თქვენი ელექტროფორეზის პალატა. უარყოფითი ენერგიის ქვეშ, თქვენი დნმ ნიმუშები იძულებითი იქნება პალატის სიგრძეზე. დნმ – ის მცირე ძაფები უფრო სწრაფად იმოძრავებს გელის მატრიქსში და მოკლე დროში ისინი თავს გამოყოფენ გრძელი, ნელი ძაფებისგან. საღებავი საღებარში საშუალებას გაძლევთ მიყვეთ დნმ-ს კვალს. თქვენ ვერ დაინახავთ დნმ – ის ინდივიდუალურ ძაფებს, მაგრამ ერთი და იგივე სიგრძის ძაფები თავს იყრიან ერთად.

დნმ-ის დალაგებისას მატრიქსი ამოღებულია ელექტროფორეზის პალატიდან. შემდეგ ხდება დნმ-ის შეღებვა, რომ უფრო ადვილი გაზომვა და გამოკვლევა მოხდეს.