TA კლონირება არის ქვეკლონირების პოლიმერაზული ჯაჭვური რეაქციის (PCR) პროდუქტების მარტივი და მოსახერხებელი მეთოდი. "TA" შემოკლებულია "თიმინი" და "ადენინი". კლონირების ეს ტექნიკა იყენებს თიმინის უნარს ჰიბრიდიზაციას ადენინზე ლიგაზების არსებობისას. შეზღუდვის ფერმენტები არ გამოიყენება, განსხვავებით ტრადიციული სუბკლონირების მეთოდით. ამის ნაცვლად, PCR პროდუქტების გამრავლება ხდება Taq polymerases ფერმენტების გამოყენებით.
მეთოდი
TA კლონირების მეთოდი იყენებს გარკვეული დეოქსირიბონუკლეინის მჟავის გადატვირთვის ტერმინალურ აქტივობას PCR პროდუქტის თითოეულ ბოლოზე.
ხაზოვანი კლონირების ვექტორი ერთჯერადი, სამი პრემიერ- T (3'-T) გადახრით, რომელსაც უწოდებენ T- ვექტორს, ამ PCR პროდუქტის პლაზმურ ვექტორად კლონირებისთვის გამოიყენება. PCR პროდუქტი შერეულია ამ ვექტორთან მაღალი პროპორციით.
ნარევს ემატება დნმ ლიგაზა (T4 ლიგაზა), რომელიც საშუალებას აძლევს ორ პროდუქტს ჰიბრიდიზაცია და შეერთება.
Დადებითი და უარყოფითი მხარეები
TA კლონირება არის PCR პროდუქტების ქვეკლონირების მოსახერხებელი მეთოდი სწორხაზოვან ვექტორში და ის ბევრად უფრო მარტივი და სწრაფია, ვიდრე ტრადიციული ქვეკლონირების მეთოდები. იმის გამო, რომ ეს მეთოდი არ იყენებს შეზღუდვის ფერმენტებს, კლონირდება პროდუქტები, რომელთაც არ გააჩნიათ შეზღუდვა ფერმენტების ადგილზე.
მინუსი ის არის, რომ TA კლონირების ნაკრები ძალიან ძვირია და, შესაბამისად, მათი გამოყენება შეზღუდულია. გარდა ამისა, არ არსებობს მიმართულების კლონირება; ასე რომ, საპირისპირო მიმართულებით კლონირების ალბათობა უფრო დიდია.
TA კლონირების ნაკრები
რამდენიმე მწარმოებელი ყიდის TA კლონირების კომპლექტებს. ზოგიერთი მათგანია Invitrogen, QIAGEN და Premier Biosoft.