כימאים משתמשים בכרומטוגרפיה נוזלית עם ביצועים גבוהים, או HPLC, להפרדת תערובות של תרכובות. באופן כללי, השיטה מורכבת מהזרקת דגימה לעמוד שם הוא מתערבב עם ממס אחד או יותר. תרכובות שונות סופחות, או "נדבקות", לעמודה בדרגות שונות; וכאשר הממיס דוחף את התרכובות דרך העמודה, אחד מרכיבי התערובת ייצא מהעמוד תחילה. המכשיר מזהה את התרכובות כאשר הן יוצאות מהעמוד ומייצר כרומטוגרמה המורכבת מעלילה עם זמן השמירה על ציר ה- x ועוצמת האות מהגלאי על ציר ה- y. כאשר התרכובות יוצאות מהעמוד, הן מייצרות "פסגות" בכרומטוגרמה. באופן כללי, ככל שהפסגות בכרומטוגרמה רחוקות יותר זו מזו והרזולוציה גבוהה יותר. מדענים רואים ברזולוציה של 1.0 ומעלה מייצגת הפרדה נאותה.
מדוד את הרוחב של שתי פסגות סמוכות בכרומטוגרמה על ידי ציון היכן ערכי ציר ה- X נמצאים בבסיס כל שיא. ציר ה- x מייצג זמן שמירה, הנמדד בדרך כלל בשניות. לפיכך, אם שיא מתחיל ב- 15.1 שניות ומסתיים ב- 18.5 שניות, רוחבו הוא (18.5 - 15.1) = 3.4 שניות.
קבע את זמני השמירה על ידי ציון הזמן, כלומר המיקום על ציר ה- x, המתאים למיקומי המקסימום של הפסגות. ערך זה בדרך כלל יהיה באמצע הדרך בין שני הערכים המשמשים לחישוב הרוחב בשלב 1. הדוגמה שניתנה בשלב 1, למשל, תציג מקסימום בערך 16.8 שניות.
חשב את הרזולוציה, R, בין שתי פסגות על ידי:
R = \ frac {RT_1-RT_2} {0.5 (W_1 + W_2)}
איפה RT1 ו- RT2 מייצגים את זמני השמירה של פסגות 1 ו -2, ו- W1 ו- W2 מייצגים את רוחב הפסגות שנלקחו בבסיסיהם. בהמשך לדוגמה משלב 2 ו -3, שיא אחד מציג זמן שמירה של 16.8 שניות ורוחב של 3.4 שניות. אם הפסגה השנייה הציגה זמן שימור של 21.4 שניות עם רוחב של 3.6 שניות, אז הרזולוציה תהיה:
R = \ frac {21.4-16.8} {0.5 (3.4 + 3.6)} = 1.3
דברים שתזדקק להם
- כרומטוגרמה של HPLC
- מַחשְׁבוֹן