נהלי מעבדת ג'ל אלקטרופורזה

אלקטרופורזה ג'ל הינה שיטה המשמשת במעבדות למדידת ומיון גדילי DNA. זה הכרחי מכיוון ש- DNA בתנאים רגילים הוא קטן מכדי לתפעל אותו, אפילו כאשר משתמשים בו ברוב המיקרוסקופים. המעבדה לאלקטרופורזה בג'ל משתמשת בהליך פשוט יחסית, וניתן להשתמש באותה טכניקה בסיסית גם להפרדת חלבונים בודדים.

כדי להתחיל בהליך ג'ל אלקטרופורזה, ראשית עליך ליצור את הג'ל. בדרך כלל, ג'לים מיוצרים ביריעות דקות באמצעות חומר הנקרא agarose. אגרוזה אבקתית מונחת בבקבוק, ואחריה תמיסת מי מלח הנקראת מאגר. תערובת זו של agarose ומאגר מחומם עד ששני החומרים נמסים יחד, ואז נשפך לתבנית יוצרת. לאחר מכן מניחים מכשיר הנקרא מסרק בקצה אחד של התבנית לפני שהג'ל מתקרר. כאשר מקורר את הג'ל, מסירים את המסרק ומשאירים חריצים קטנים שישמשו להחזקת דגימות DNA.

מאפיין מיוחד של תערובת האגרוז המקוררת (המכונה מטריצת ג'ל) נובע מכך שהיא נוצרת עם מי מלח. כאשר היא מחושמלת, המטריצה ​​תהפוך למוליכה ותאפשר לחשמל לזרום לאורכו. מאפיין מיוחד נוסף של מטריצת הג'ל הוא נוכחותם של חורים מיקרוסקופיים רגילים. חורים אלה יאפשרו לחוטי DNA לנסוע דרך מטריצת הג'ל ולהקל על תהליך המיון.

הצעד הבא שלך הוא ליצור תא אלקטרופורזה. זוהי קופסה מלבנית קטנה, מחוברת עם חיבור חשמל חיובי ושלילי משני קצותיו. החדרים הם בדרך כלל רדודים, קטנים מספיק כדי להתאים על שולחן, ובנויים מחומרים שקופים כמו פרספקס.

תמיסת מי מלח נשפכת לתחתית תא האלקטרופורזה, ומטריקס הג'ל שקוע מעט בתוך פתרון זה. מי המלח משרתים שתי מטרות: סיוע לזרימת החשמל ושמירה על מטריקס הג'ל. מכיוון ש- DNA מונע על ידי מטען שלילי, הצב את המטריצה ​​שלך כך שהדגימות שלך יהיו ממוקמות ליד החיבור החשמלי השלילי שלך.

לאחר מכן מכינים דגימות DNA. מכיוון ש- DNA בתמיסה הוא כמעט בלתי אפשרי לראות, חומר צביעה הנקרא חיץ טעינה מתווסף לכל דגימה בודדת. גורם זה גם מעבה את תמיסת ה- DNA, מה שהופך אותו פחות נוזלי ועביד יותר. בעזרת פיפטה, מעבירים דגימה של תמיסת DNA לכל חריץ מתחלף במטריצת הג'ל. בחריץ הריק בין כל דגימה, הציב פתרון כלשהו של DNA שאורכו כבר ידוע לך (המכונה תקן DNA) לבקרת ניסויים והשוואה.

עכשיו, הפעל את תא האלקטרופורזה שלך. תחת כוח שלילי, דגימות ה- DNA שלך ייאלצו לכל אורך החדר. קווצות DNA קטנות יעברו במהירות רבה יותר דרך מטריצת הג'ל, ותוך זמן קצר הם יפרידו עצמם מגדילים ארוכים ואיטיים יותר. הצבע בחומר הצביעה מאפשר לך לעקוב אחר מסלול ה- DNA. לא תוכל לראות קווצות DNA בודדות, אך קווצות באותו אורך יתגודדו.

כאשר ה- DNA מסודר, המטריצה ​​מוסרת מחדר האלקטרופורזה. לאחר מכן מכתים את ה- DNA כדי לאפשר מדידה ובדיקה קלים יותר.