באלקטרופורזה ג'ל מופרדות דגימות של DNA או חלבונים - בדרך כלל על בסיס גודל - על ידי יישום שדה חשמלי שגורם להם לנדוד דרך ג'ל. השימוש באלקטרופורזה ג'ל הוא שגרתי במעבדות מחקר ביו-רפואיות ומשמש למענה על מגוון שאלות שונות, כך שאין באמת דרך אוניברסלית לנתח את התוצאות.
טכניקות שונות כמו סופג מערבי, סופג צפוני וסופג דרומי, למשל, כוללות מעורבות ג'ל אלקטרופורזה.
אם אתה עושה ג'ל אגרוזה אלקטרופורזה של דגימות DNA, ההליך הנפוץ ביותר, בדרך כלל תצטרך לעשות לפחות שני דברים: 1) להבחין ללא חתך פלסמידים ממוספים, פלסמידים מכותרים ופלסמידים חתוכים, 2) מעריכים את גודל שברי ה- DNA השונים בעזרת עקומה סטנדרטית של Excel או מַחשְׁבוֹן.
בדוק את מחברת המעבדה שלך כדי לקבוע אילו דוגמאות הועמסו לאיזה נתיבים. כאשר העמסת את הבארות עבור הג'ל שלך, היית צריך לציין את זהות כל נתיב / דגימה.
בעזרת סרגל, מדוד את המרחק בתמונה שלך מהבארות לצבע המעקב נסעו רחוק יותר מכל אחת מלהקות ה- DNA (במילים אחרות, זה יהיה בתחתית ה- לְהַגלִיד). רשום מספר זה - היחידות בהן אתה משתמש אינן חשובות.
מדוד את המרחק בתמונה שלך מהבארות לכל אחד מהלהקות ב"סולם ", ואז חלק את המרחק המרחק שעבר
צבע מעקב לְהִתְאַגֵד. חישוב זה נותן לך את הניידות היחסית של כל רצועה.דוגמה: נניח שרצועת צבע המעקב עברה 6 אינץ 'ויש לנו שלוש להקות שנעו 5, 4.5 ו -3.5 אינץ'.
מה הניידות היחסית שלהם? תשובה: אנו מחלקים 5, 4.5 ו -3.5 ל -6 כדי להשיג ניידות יחסית של 0.833, 0.75 ו- 0.5833.
היצרן נותן לך את הגודל של כל שבר בסולמות שהם מספקים, כך שכבר אמור להיות לך מידע זה.
השתמש בפונקציה Trendline בתוכנית הגיליונות האלקטרוניים שלך כדי להתאים משוואה לנתונים. משוואה זו צריכה להיות משוואת הספק (למשל x ^ -2) והיא צריכה להתאים לנתונים יחסית טוב (מקדם R של 0.9 לפחות). זה יוצר עקומה ועקומה סטנדרטית לְהִצטַיֵן.
זכור ששברי DNA קטנים יותר עוברים רחוק יותר דרך הג'ל מאשר שברי DNA גדולים, כך שהקרובים ביותר לצבע המעקב יהיו הקטנים ביותר. שים לב, עם זאת, שאם פלסמיד (עגול) דנ"א אינו חתוך, הוא יהפוך ל"סופר-על "או מעוות כמו כבל טלפון, מה שיגרום לו למעשה לנסוע רחוק יותר מאשר DNA ליניארי באותו גודל.
כמו כן, פלסמיד "מכונה" שנחתך בצורה חלקית יעבור א קצר יותר מרחק מאשר DNA ליניארי באותו גודל. כתוצאה מכך, אינך יכול להעריך את גודל הפלסמידים שלא נחתכו מהג'ל שלך.
התאם את הלהקות בכל נתיב לזהות המדגם שטענת בנתיב זה וקבע אם מה שאתה רואה הוא מה שהיית מצפה. זה יהיה תלוי באופי הניסוי שלך.
אולם באופן כללי, אם תעכלו פלסמיד הוספה עם שני אנזימי הגבלה, הייתם מצפים שההכנסה תשוחרר מהפלסמיד.
מכיוון שהוא קטן בהרבה מהפלסמיד, היית מצפה לראות שני פסים בנתיב זה, אחד ליד החלק העליון והשני למטה ליד התחתית. חתך פלסמיד עם אנזים הגבלה אחד בלבד צריך ליצור רק רצועה אחת הנעית קצת יותר רחבה מהפלסמיד שנחתך עם שניים אנזימי הגבלה, אבל לא קרוב עד להכניס.
מדוד את המרחק מהבארות לפלסמיד החתוך והכנס רצועות עם הסרגל שלך. חלק את המספרים האלה לפי המרחק שעבר צבע המעקב כדי למצוא ניידות יחסית של מוסיף ופלסמידים חתוכים.