מרק תזונתי נוזלי משמש לתרבית חיידקים כמו Escherichia coli. מתכונים למרק זה משתנים בהתאם למין החיידקים ולנוכחות של שינויים גנטיים, למשל, עמידות לאנטיביוטיקה. ניתן לממצק את המרק על ידי הוספת אגר, המאפשר לחיידקים ליצור מושבות מובחנות, ואילו בתרבית נוזלית הם פשוט מתפזרים בכל הנפח. זוהי טכניקה בסיסית אך חיונית לשיטות מתקדמות כגון שיבוט גנים או מבחני מיקרוביולוגיה. מאמר זה מניח כי יש לטפח את זני Escherichia coli במעבדה הסטנדרטיים על צלחות אגר (או צלחות פטרי) של מרק לוריא (LB).
שקלו 10 גרם טריפטון בדרגה חיידקית, 5 גרם תמצית שמרים, 5 גרם נתרן כלורי, 15 גרם אגר או אגרוזה, ומיליטר 1 נתרן הידרוקסיד. מערבבים את אלה עם נפח מים סטריליים מזוקקים ומוטובלים עד לקבלת 1 ליטר מדיום. שפר את כלי התקשורת בבקבוקים או צלוחיות מכוסות ברפיסה למשך 25 דקות. הניחו להתקרר לכ- 50 מעלות צלזיוס לפני הוספת ריאגנטים שיושמדו בחום גבוה, כגון אנטיביוטיקה או תוספי תזונה אחרים.
תן לתקשורת החיטוי להתקרר עד 50 מעלות צלזיוס ולא נמוכה מ- 45 מעלות צלזיוס, מכיוון שהאגר ישקע במיכלו לפני שניתן יהיה לשפוך אותו. השג צלחות פטרי סטריליות ושפך מספיק כדי לכסות את כל שטח הפנים של הצלחת ולפחות מחצית מעומקה. הימנע ממילוי יתר של הצלחות ורצוי שלא לאפשר לאגר ליצור קשר עם הקצה העליון של המנה. אפשר לצלחות להתמצק בסביבה סטרילית (למשל מתחת למכסה המנוע זרימה למינרית) על ידי השארת המכסים ופינת מכסה המנוע.
ייבש את הצלחות. אף על פי שניתן להשתמש בצלחות ברגע שהתייצבו, ישנה לחות מסוימת על פני האגר, מה שימנע ממושבות חיידקים להידבק מספיק. לכן, עדיף לייבש את הצלחות לפני שמורחים חיידקים כלשהם, למשל על ידי השארתם לשבת בחוץ טמפרטורת החדר למשך כמה ימים או למשך חצי שעה מתחת למכסה המנוע הזרימה למינרית או ב 37 מעלות צלזיוס מַדגֵרָה.
אחסן את הצלחות. יש לערום צלחות יבשות במהופך (הפוך) על מכסהיהן ולהחזיר אותן למקור אריזה, מוקלטת ועטופה בנייר כסף כדי להגן מפני אור או במתאים מְכוֹלָה. רשום תמיד על תאריך ההכנה על הצלחות והימנע משימוש אם הצלחות מעל גיל חודשיים.
הפניות
- "פרוטוקולים עכשוויים בביולוגיה מולקולרית"; קארן אלבינג ורוג'ר ברנט; 2002
טיפים
- בצע כמה שיותר מהשלבים שלעיל (רצוי שכולם) בסביבה סטרילית (למשל תחת להבה פתוחה, או מכסה זרימה למינרי) בכדי למנוע מזהמים חיידקיים מוטסים להיכנס ולצמוח באזור כְּלֵי תִקְשׁוֹרֶת.
על הסופר
פאלמר אוויונג הוא בעל תואר שני בעסקים בינלאומיים מאוניברסיטת קליפורניה בסן דייגו בוגר תואר ראשון באמנויות בסוציולוגיה מאוניברסיטת קליפורניה בסנטה ברברה והינו מולקולרי מאומן ביולוג. הוא סופר עצמאי מאז 2006. בנוסף לכתיבה, הוא סוחר פורקס במשרה מלאה ומשווק באינטרנט.
נקודות זיכוי
Jupiterimages / Comstock / Getty Images