כיצד לחשב CFU מדילול

המורה שלך מגיש לך דגימת חיידקים ושואל אותך: כמה מיקרואורגניזמים קיימא יש במדגם זה? מה המשמעות של זה, ואיך אתה מבין את זה? שיטה אחת היא על ידי מציאת מספר יחידות יוצרות מושבה(CFU).

CFU מתייחס למספר המושבות האינדיבידואליות של כל מיקרואורגניזם שצומח על צלחת מדיה. ערך זה מייצג בתורו את מספר החיידקים המסוגלים להשתכפל מכיוון שהם יצרו מושבות על הצלחת. יש נוסחת CFU הכוללת דגימה.

ספירת מספר החיידקים בדגימה נוזלית קשה מאוד. יש יותר מדי כאלה, והם קטנים מדי. יתר על כן, חלקם עשויים להיות מתים ואחרים חיים, והמתים לא צריכים לספור בסך הכל. אתה מתעניין רק ב בַּר חַיִים חיידקים, או חיידקים שיכולים להשתכפל. אז איך תוכלו להבין כמה חיידקים יש לכם?

באותו אופן שבו אתה יכול לעשות סקר של 1,000 איש ולהחיל אותו על 10,000 אנשים כדי להבין כיצד הם עשויים לחשוב על נושא מסוים. אתה יכול לנסות לקחת חלק קטן מהדגימה המקורית שלך, להבין בכמה חיידקים יש את החלק הזה, ואז חישב בכדי לקבוע כמה יכולות להיות במקור לִטעוֹם.

ההליך לאיתור CFU של מדגם נתון כולל דילול ראשון של המדגם. לאחר מכן מצפים את הדילולים על גבי צלחות עם מצע הגידול הנכון. דילולים מרובים הם לרוב רעיון טוב שכן המדגם המקורי יכול להיות מרוכז מאוד.

לאחר שאיפשרו לחיידקים לצמוח על הצלחות למשך זמן נתון, מושבות בודדות נספרים על צלחת. אם הדגימה הייתה מרוכזת מדי אז במקום מושבות בודדות תראה שטח גדול מכוסה בצמיחת חיידקים הנקראת a דֶשֶׁא. זה אומר שעליך לדלל עוד יותר את הדגימה שלך ולנסות לגדל שוב כדי שתוכל לראות מושבות בודדות.

מאחר ומושבות בודדות מגיעות מחיידק יחיד ששכפל את עצמו פעמים רבות, רק אלה נחשבות לכדי CFU.

דוגמה לשימוש בדילולים לביצוע חישוב CFU יכולה ללכת באופן הבא: ראשית, מהמדגם הראשוני שמורה לך המורה שלך, אתה לוקח 1 מ"ל ומצלח אותו. למחרת רואים שיש מדשאה של חיידקים. זה אומר שאתה לא יכול לספור את מספר ה- CFU. השלב הבא הוא ביצוע כמה דילולים.

ראשית, אתה לוקח 1 מ"ל של מדגם ומדלל אותו ל 9 מ"ל של מדיה נוזלית. מכיוון שהדילול הוא מדגם חלק אחד לתשעה חלקי דילול, הוא מכונה דילול 1:10. לאחר מכן, אתה לוקח 1 מ"ל של דילול 1:10 ומוסיף את זה ל 9 מ"ל של מדיה נוזלית. דילול זה הוא דילול של 1: 100. לבסוף אתה מבצע דילול של 1: 1,000 על ידי נטילת 1 מ"ל של דילול 1: 100 והוספת 9 מ"ל של מדיה נוזלית. עבור כל דילול, כעת יש לך 10 מ"ל של תרבית חיידקים מדוללת.

דילולים נעשה, אתה צלחת 0.5 מ"ל של דילולים על צלחות. הקפד לתייג את הצלחות איתן ציפתה הדילול.

למחרת אתה חוזר ורואה שבכל הלוחות יש כמה מושבות בודדות. אתה רוצה לבחור צלחת בין 30 ו -300 מושבות. אתה רואה שלצלחת הדילול של 1: 1,000 יש כ -10 מושבות, כך שאתה מדלל יותר מדי את הדגימה. הלוח הזה לא יעזור במציאת CFU.

בצלחת הדילול 1:10 יש מושבות רבות, אולי יותר מ -300. במקרה כזה אתה יכול ללכת לצלחת 1: 100. אתה סופר את המושבות בצלחת זו ומגלה שיש בה 179 מושבות. משמעות הדבר היא כי 0.5 מ"ל של דילול 1: 100 מכיל 179 CFU. אבל מה עם המדגם המקורי?

כעת, לאחר שיש לכם נתונים מסוימים, תוכלו לבצע את חישוב ה- CFU במדגם המקורי.

1. קח את הכמות שציפית (0.5 מ"ל) והכפל במקדם הדילול (0.01) כדי להניב 0.005. עליך לעשות זאת כדי למצוא את גורם הדילול שהניב את ספירת ה- CFU שלך. הנה, חצי מיליליטר של דילול 1: 100 אפשר לך לספור CFU.

2. חלק את CFU מהדילול (179) לפי התוצאה משלב 1 (0.005) כדי להניב 35,800 CFU.

משמעות הדבר היא כי 1 מ"ל המקורי של המדגם שדולל מכיל 35,800 CFU. דרך נוספת לנסח זאת היא לומר שבמדגם המקורי יש 35,800 CFU / mL.

CFU הוא כלי נהדר למצוא כמה חיידקים, פטריות או כל מיקרואורגניזמים יש במדגם נתון. שיטת הציפוי המתוארת כאן מועילה במיוחד עבור דגימות או אורגניזמים מרוכזים מאוד שאינם גדלים היטב בתרבית נוזלית.