כשעובדים עם כרומטוגרפיה נוזלית עם ביצועים גבוהים (HPLC), כיול טוב הוא חיוני בהחלט על מנת להבטיח תוצאות אמינות ואיכותיות. כיול נכון של מכשיר HPLC מתחיל בהכנת תקן כיול מתאים. ברוב המקרים כיול דורש למעשה סדרה של סטנדרטים של הגדלת ריכוז על מנת לייצר מה שמכונה עקומת כיול. זהו קו משורטט ומשוואה משויכת המתארת את הקשר בין ריכוז החומר הכימי הנבדק לתגובת גלאי ה- HPLC.
קבע את הכימיקל שברצונך לבדוק באמצעות ה- HPLC (ה"אנליט "). לדוגמה, ייתכן שתרצה לבדוק סדרת משקאות קלים לגבי תכולת פרוקטוז, ובמקרה זה פרוקטוז יהיה הניתוח.
השג כמות של כימיקל אנליטי בעל טוהר מתאים. בדרך כלל הטוהר צריך להיות מעל 99% ואת האנליט יש לרכוש מחברת אספקת כימיקלים מכובדת. במקרה של פרוקטוז, למשל, היית רוכש פרוקטוז טהור מספק כימיקלים ולא ממכולת.
קבע את הריכוזים המקסימליים והמינימליים הצפויים של האנליט בדגימות שאתה מתכוון לבדוק ב- HPLC. במקרה של משקאות קלים, היית בוחן את תוויות המשקאות וקובע את תכולת הפרוקטוז הנמוכה והגבוהה ביותר בין המשקאות שתבדוק. יש לזכור כי המדגם הראשוני (המשקה הקל) עלול להיות מדולל או לתמרן בדרך אחרת במהלך ההכנה לניתוח (תלוי בשיטת ה- HPLC בה נעשה שימוש) וכך עשוי להיות ריכוז האנליטים בדגימות המוזרקות למעשה ל- HPLC שונה. יש לקחת בחשבון את ריכוז האנליטים בדגימות כפי שהם פועלים ב- HPLC.
קבע את הממיס בו תמיס את האנליטי שלך כדי להרכיב תקני כיול. ממס זה חייב להיות מסוגל להמיס כראוי את הניתוח בטווח ריכוז רחב יחסית (גבוה לפחות כמו בדגימות שאתה מתכוון לבדוק). כמו כן, ממס זה אמור להיות די דומה ל"שלב הנייד: "הממס המשמש לנשיאת דגימות דרך מכשיר ה- HPLC.
חשב את כמות האנליטים הנדרשת להכנת פתרון "סטנדרטי מלאי" של הניתוח. זה נמצא על ידי הכפלת הריכוז הנדרש של תקן המניות בנפח הרצוי. ריכוז האנליט בתמיסה זו צריך להיות גבוה ב -10% לפחות מריכוז הדגימה הגבוה ביותר. אם ריכוז הפרוקטוז הצפוי ביותר בדגימת משקאות קלים הוא 8 גרם / 100 מיליליטר, ניתן היה לעשות את תקן המלאי לריכוז של 10 גרם פרוקטוז / 100 מיליליטר. נפח סביר הוא 500 מיליליטר, ולכן יידרש 8/100 מ"ל x 500 מ"ל = 40 גרם פרוקטוז.
שקלו את כמות האנליטים הנדרשת לרמת דיוק מתאימה. לעיתים קרובות ערך משקל בגרמים מדויק למקום אחד או שניים עשרוני מתאים, אך ייתכן שיהיה צורך ליתר דיוק בכמה שיטות.
העבר את האנליט השקול לבקבוק נפח בנפח הדרוש והוסף את הממיס הרצוי לסימן המילוי על הבקבוקון. שימוש בבקבוק נפח (ולא בכוס מדורגת, למשל) מגדיל את הדיוק בערך הריכוז הסטנדרטי של המניה. ודא שכל האנליטי מועבר לבקבוק; השתמש בכמה מהממיסים בכדי לשטוף אותו במידת הצורך.
הפוך סדרה של דילולים משתנים של תקן המלאי על ידי העברת נפחים ידועים של תקן המניות לבקבוקי נפח, באמצעות פיפטות להעברה מדויקת, ואז הוספת ממס. הריכוז הסטנדרטי הנמוך ביותר צריך להיות מתחת למדגם הנמוך ביותר שצפוי לניתוח. בדוגמה לשתייה קלה, אם ריכוז הפרוקטוז הצפוי הנמוך ביותר במדגם הוא 2 גרם / 100 מ"ל, ניתן ליצור תקן של 1 גרם / 100 מ"ל. זה ייעשה על ידי דילול פי עשרה של תקן המניות. הסדרה הסטנדרטית צריכה לכלול סך של 5 או 6 ריכוזים, כך שיידרשו דילולים נוספים לייצור תקנים של 3, 5 ו -8 גרם פרוקטוז / מ"ל. כעת יש לך סדרה של פתרונות סטנדרטיים באמצעותם ניתן לכייל את ה- HPLC.