Gli scienziati utilizzano la citometria a flusso per distinguere tra diversi tipi di cellule o organismi microscopici. È uno strumento utilizzato in molte applicazioni come la diagnostica medica o la patologia forense. Mentre questa tecnica sperimentale è abbastanza facile da realizzare, l'analisi dei dati complessi prodotti dal citometro a flusso è più difficile a causa dei molteplici fattori sperimentali e/o citometro parametri. Pertanto, è normale che i dati citometrici vengano visualizzati e analizzati utilizzando sofisticati programmi professionali come CELLQuest o FlowJo. La familiarità con tecniche, macchinari e software di citometria a flusso è necessaria per comprendere i risultati prodotti da questi produced esperimenti.
Chiarire lo scopo dell'esperimento chiedendo: "Qual era la domanda o l'ipotesi oggetto di indagine?" Questo sarà necessario per regolare i risultati grezzi nel formato e nelle impostazioni appropriati per ulteriori analisi utilizzando la citometria statistica Software. Apportare le modifiche necessarie per visualizzare i dati con le impostazioni pertinenti (ad es. cellule positive, porte negative, intensità di fluorescenza, popolazioni cellulari ecc.).
Trova i cancelli. Le celle possono essere raggruppate o semplicemente osservate raggruppate insieme su un diagramma di densità o un diagramma di contorno. I gruppi spesso si separano a seconda della loro identità. Se un gruppo si colora molto intensamente per un particolare marcatore o anticorpo, si conclude che i membri di quel gruppo hanno tutti l'identità del tipo cellulare specifico, che esprime quel marcatore. È comune trovare cellule positive per più di uno di questi marcatori e queste cellule sono solitamente intermedie e indicate come "doppio positivo".
Guarda i grafici a dispersione. Il modo in cui i gruppi di celle si distribuiscono in un grafico a dispersione è un'indicazione della dimensione delle celle. Le cellule con dispersione molto grande o alta sono tipicamente cellule grandi; tuttavia, possono essere grandi semplicemente perché contengono un'alta percentuale di citoplasma, oppure possono essere alti perché hanno un nucleo molto grande. A seconda della biologia oggetto di indagine, questo ovviamente varierà ampiamente tra gli esperimenti.
Guarda i numeri. Regolare i grafici per visualizzare parametri diversi su un asse (di solito l'asse X) mantenendo i conteggi sull'asse Y. Questo indica la proporzione della popolazione campione che è positiva per quel particolare parametro, come a il picco si osserverà normalmente in un campione colorato positivamente, che sarà assente dal controllo negativo campione.
Guarda gli istogrammi a più parametri. Regolando l'asse X e l'asse Y per rappresentare ciascuno un parametro diverso che era indagato durante l'esperimento, è possibile ottenere una comprensione più profonda delle proprietà del campione. Ad esempio, impostando l'asse X su fluorescenza rossa e l'asse Y su fluorescenza verde, è possibile calcolare gate in stile quadrante per campione per mostrare quattro regioni di un quadrante in cui le cellule sono presenti e colorate per fluorescenza rossa o verde, entrambi i colori o nessuna a tutti. Ciò consente di suddividere un campione eterogeneo nelle sue parti componenti e di visualizzare e quantificare eventuali entità sovrapposte.
Riferimenti
- “Analisi dei dati di citometria a flusso”; Susan Sharrow; 1991
- “Citometria a flusso: strumentazione e analisi dei dati”; Marvin Van Dila; 1985
- “Protocolli di citometria a flusso”; Teresa e Robert Hawley; 2004
Circa l'autore
Palmer Owyoung ha conseguito un Master of Arts in International Business presso l'Università della California a San Diego e a Laureato in sociologia presso l'Università della California a Santa Barbara ed è un esperto molecolare biologo. Svolge attività di scrittore freelance dal 2006. Oltre a scrivere, è un trader Forex a tempo pieno e un Internet marketer.
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