Dopo aver eseguito i campioni di DNA su un gel di agarosio e scattato una foto, è possibile salvare l'immagine per dopo, a quel punto è possibile analizzare i risultati e interpretarli. Il tipo di cose che stai cercando dipenderà dalla natura del tuo esperimento. Se stai eseguendo l'impronta digitale del DNA, ad esempio, ti consigliamo di confrontare la dimensione dei pezzi di DNA di due campioni, dal sospetto e da un campione della scena del crimine, forse. Se stai lavorando con plasmidi di batteri, al contrario, potresti dover assicurarti che il plasmide contenga l'inserto. Di conseguenza, il modo in cui interpreterai il tuo gel dipenderà in parte dall'esperimento che hai fatto. Tuttavia, ci sono alcune regole generali che puoi applicare.
Si noti che potrebbe essere necessario o meno utilizzare le istruzioni in questa sezione. L'elettroforesi su gel di agarosio viene spesso utilizzata per confermare che un plasmide contenga un determinato inserto. Se non stai lavorando con i plasmidi, puoi saltare questa sezione. Se lo sei, tuttavia, puoi seguire queste istruzioni.
Nota che se stai lavorando con plasmidi non tagliati o intaccati, non puoi stimare la dimensione usando la procedura della sezione 1 sopra. Questo perché i plasmidi non tagliati e intaccati migrano a velocità diverse dal DNA lineare.
Confronta il numero di bande in ogni corsia. Ricordiamo che un enzima di restrizione taglia il DNA nei siti in cui si verifica una data sequenza chiamata sito di restrizione. Se un campione è stato trattato con DUE enzimi di restrizione, dovrebbero essere presenti entrambe una banda per l'inserto e una banda per il resto del plasmide. Questo perché l'inserto sarà affiancato da due siti di restrizione, ciascuno per un enzima diverso, quindi i tagli in entrambi questi siti libereranno l'inserto dal plasmide. Un taglio in un solo sito, al contrario, convertirà il plasmide in DNA lineare. Un campione tagliato senza enzimi di restrizione o un enzima di restrizione, quindi, dovrebbe presentare una singola banda, mentre un campione tagliato con due enzimi di restrizione dovrebbe presentare due bande.
Cerca le bande create dal DNA plasmidico intaccato. Un plasmide intaccato ha un taglio solo in un singolo filamento, quindi migra più lentamente di un plasmide tagliato. I plasmidi tagliati a loro volta migrano più lentamente del DNA non tagliato.
Stimare la dimensione dell'inserto utilizzando la procedura descritta nella Sezione 1 e determinare se corrisponde alle proprie aspettative (che varieranno a seconda dell'esperimento).
Cose di cui avrai bisogno
- Matita
- Carta
- Programma per fogli di calcolo
- Foto del tuo gel
- Righello