L'elettroforesi su gel è uno dei principali metodi utilizzati in biologia molecolare per l'analisi del DNA. Questo metodo prevede la migrazione di frammenti di DNA attraverso un gel, dove vengono separati in base alle dimensioni o alla forma. Tuttavia, anche un metodo scientificamente valido come l'elettroforesi su gel non è immune da errori.
Come funziona l'elettroforesi
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L'elettroforesi su gel comporta l'uso di un gel solitamente costituito da polimeri come l'agarosio. Il gel è immerso in una soluzione tampone che conduce un campo elettrico. Il campione di DNA di interesse viene prima frammentato utilizzando enzimi di restrizione e quindi iniettato nel gel. Quando il campo elettrico è attivato, i frammenti di DNA nel gel migrano verso l'elettrodo positivo. Se i frammenti di DNA sono di dimensioni diverse, i tempi di migrazione saranno diversi per ogni frammento di dimensioni. I frammenti vengono quindi visualizzati utilizzando un colorante o un'autoradiografia e sono visibili come bande nel gel.
Contaminazione del campione
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La principale applicazione dell'elettroforesi è come strumento per l'analisi del DNA in biologia molecolare, ma è anche utilizzata in medicina legale come mezzo per identificare campioni da una scena del crimine. È importante ridurre al minimo le fonti di errore in questa tecnica per ottenere risultati accurati. Una fonte di errore è la contaminazione del campione di DNA. Se c'è DNA estraneo nel campione, il gel avrà più bande di quelle che si troverebbero in un gel che contiene solo il campione purificato.
Problemi con il gel, la corrente e il tampone
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Anche la concentrazione del gel deve essere corretta per evitare errori. Se la concentrazione è troppo alta o troppo bassa, i frammenti migreranno troppo lentamente o troppo rapidamente. Questo porterà ad errori nella risoluzione delle diverse bande. Durante l'esecuzione dell'elettroforesi, è necessario prestare attenzione per garantire che la tensione sia costante. Eventuali fluttuazioni di tensione provocheranno una migrazione instabile dei frammenti di DNA, portando a errori nella lettura delle bande. Anche la soluzione tampone deve essere della composizione corretta, poiché un tampone con pH o concentrazione ionica errati cambierà la forma dei frammenti di DNA, modificandone anche i tempi di migrazione.
Visualizzazione corretta
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Ancora più importante, il gel deve essere visualizzato correttamente. Se la concentrazione del colorante o della sonda radioattiva utilizzata per visualizzare i campioni è troppo alta, l'immagine risultante sarà molto disordinata, poiché verranno visualizzati anche frammenti residui. Se la concentrazione del gel è troppo bassa, non ci sarà visualizzazione. Quando i processi corretti sono stati seguiti durante tutte le fasi, l'elettroforesi su gel fornirà risultati accurati e che possono essere utilizzati con grande sicurezza. Come con tutte le procedure scientifiche, l'elettroforesi su gel può essere soggetta a errori, ma questi possono essere ridotti al minimo con un'adeguata preparazione e manipolazione.