Quando si testa l'effetto del pH sull'attività enzimatica, è necessario variare il pH. Tuttavia, puoi farlo in modi buoni o cattivi. Tieni presente quali fattori aggiuntivi possono confondere gli effetti della variazione del pH. Altrimenti, i risultati ottenuti potrebbero non essere dovuti alla variazione del pH, ma a qualche altro fattore. Sapere come variare correttamente il pH e quali fattori confondono il pH di un esperimento ti aiuterà a ottenere buoni risultati e a capire perché i tuoi risultati potrebbero non essere esattamente quelli che ti aspettavi.
Cambia solo una cosa
Quando si testa l'effetto del pH sull'attività enzimatica, variare solo il pH mantenendo costanti gli altri fattori. Questi altri fattori includono la concentrazione dell'enzima, la concentrazione del substrato e la temperatura. I fattori che rimangono costanti sono chiamati variabili di controllo. Le variabili di controllo ti permettono di concludere che i risultati sull'attività enzimatica ottenuti nel tuo esperimento sono dovuti alla variazione del pH, la variabile indipendente. Sapere quali fattori non modificare in un esperimento è importante quanto sapere quale fattore variare, altrimenti sarà difficile concludere se i risultati siano effettivamente dovuti all'unica cosa che era testato.
Scegli un acido o una base
Il pH di una soluzione può essere modificato sciogliendo diverse quantità di un acido o di una base in acqua. Un modo per testare l'effetto del pH sull'attività enzimatica consiste nell'aggiungere gradualmente gocce di un acido forte o di una base forte nella soluzione che contiene l'enzima, quindi osservare il punto in cui l'attività dell'enzima rallenta o fermate. Un acido è definito come un composto che dona uno ione idrogeno, chiamato protone (H+), e una base è definita come un composto che dona uno ione idrossido (-OH). Acidi e basi diversi hanno un numero diverso di protoni o ioni idrossido da cedere. Non tutti i protoni o gli ioni idrossido vengono donati immediatamente quando un acido o una base vengono aggiunti a una soluzione, ma il numero di protoni o ioni idrossido donati cambia il pH a velocità diverse. Pertanto, è una buona idea variare il pH in un esperimento enzimatico utilizzando solo un tipo di acido o un tipo di base. In caso contrario, vengono aggiunte involontariamente altre variabili.
Anche i tessuti cambiano il pH
Alcuni esperimenti di laboratorio che studiano l'attività enzimatica comportano la macinazione di tessuto fresco per rilasciare gli enzimi dalle cellule e quindi l'aggiunta di substrato per misurare l'attività enzimatica. Il tessuto fresco contiene sangue. A causa della presenza di enzimi nel sangue che modificano il gas di anidride carbonica disciolto nel sangue in acido carbonico, il tessuto stesso può influenzare il pH. Pertanto, negli esperimenti che coinvolgono l'attività enzimatica in tessuti freschi, è utile lavare via il sangue in un bicchiere di acqua fredda prima di macinare il tessuto. Ciò ridurrà al minimo il cambiamento involontario del pH dovuto al tessuto, in modo che possa essere studiato il cambiamento intenzionale del pH.
Mantieni le stesse dimensioni
Come discusso sopra, la concentrazione dell'enzima è un fattore di controllo che non deve essere variato quando si testa l'effetto del pH sull'attività enzimatica. Tuttavia, le procedure sperimentali variano ancora intrinsecamente la concentrazione dell'enzima in modi sottili. Se si utilizza una soluzione pura di enzimi, mantenere costante la concentrazione degli enzimi. Tuttavia, negli esperimenti in cui l'enzima proviene da tessuto fresco, come pezzi di patate, pezzi di piante o pezzi di fegato, la dimensione dei pezzi cambia la quantità di enzima in ciascuna provetta. Pertanto, sarà utile tagliare i pezzi di tessuto nel modo più uniforme possibile. Questo è un altro esempio di come sapere cosa non cambiare, e perché è difficile non evitare del tutto il cambiamento, aiuta a interpretare i risultati della variazione di un fattore come il pH.