HPLC offre un metodo rapido, automatizzato e altamente accurato per identificare determinati componenti chimici in un campione, ma può essere costoso, complesso e non funziona per tutti i campioni. I laboratori medici, forensi, ambientali e di produzione utilizzano la tecnica per quantificare e separare le sostanze chimiche in un campione. HPLC presenta sia vantaggi che svantaggi rispetto ad altre tecniche.
HPLC e tecniche simili
Come altre forme di cromatografia, l'HPLC consente la separazione dei costituenti chimici attraverso l'uso di una fase mobile e di una fase stazionaria. La fase mobile è liquida e la fase stazionaria è solida. Poiché i diversi componenti si muovono a velocità diverse, si separano gli uni dagli altri. Le tecniche alternative includono l'elettroforesi capillare, in cui le sostanze migrano attraverso soluzioni in un circuito elettrico campo e altri metodi cromatografici come estrazione in fase solida, gascromatografia e strato sottile cromatografia.
Velocità, efficienza e precisione
Rispetto ad altre tecniche cromatografiche, come la TLC, l'HPLC è estremamente veloce ed efficiente. Utilizza una pompa, anziché la gravità, per forzare un solvente liquido attraverso un materiale adsorbente solido, con diversi componenti chimici che si separano mentre si muovono a velocità diverse. Il processo può essere completato in circa 10-30 minuti e offre un'alta risoluzione. È accurato e altamente riproducibile. Poiché è in gran parte automatizzato, le esecuzioni HPLC di base possono essere eseguite con una formazione minima.
Costo e complessità
Nonostante i suoi vantaggi, l'HPLC può essere costoso, richiedendo grandi quantità di costosi prodotti organici. Tecniche come l'estrazione in fase solida e l'elettroforesi capillare possono essere più economiche e anche più rapide, soprattutto per l'analisi secondo le buone pratiche di fabbricazione. Sebbene sia relativamente facile utilizzare i metodi HPLC esistenti, può essere complesso risolvere i problemi o sviluppare nuovi metodi. Ciò è in gran parte dovuto alla serie di diversi moduli, colonne e fasi mobili.
Sensibilità e risoluzione
In generale, l'HPLC è versatile ed estremamente preciso quando si tratta di identificare e quantificare i componenti chimici. Con molti passaggi coinvolti, la precisione dell'HPLC è in gran parte dovuta al processo che è automatizzato e quindi altamente riproducibile. L'HPLC ha una bassa sensibilità per alcuni composti e alcuni non possono essere rilevati poiché vengono adsorbiti in modo irreversibile. Le sostanze volatili sono meglio separate mediante gascromatografia.