Elektroforesis gel adalah metode yang digunakan di laboratorium untuk memisahkan DNA (asam deoksiribonukleat). Ini juga dapat digunakan untuk memisahkan RNA dan protein.
Membaca hasil elektroforesis gel memungkinkan peneliti untuk menentukan ukuran untaian dalam sampel. Untuk memahami bagaimana proses bekerja, pertama-tama kita harus mempelajari definisi elektroforesis gel.
Definisi Elektroforesis Gel
Elektroforesis gel adalah alat yang ampuh digunakan dalam biologi molekuler untuk menentukan ukuran dan muatan listrik DNA, RNA dan protein. Anda mulai dengan menggunakan potongan DNA yang dicerna oleh enzim dari untai DNA yang lebih besar.
Dengan menggunakan intensitas pita elektroforesis gel sebagai hasilnya, Anda dapat mengetahui ukuran fragmennya. Seseorang kemudian dapat memperoleh sidik jari DNA.
Saat bagian "elektro" dari kata itu mengungkapkan, a definisi elektroforesis gel melibatkan penggunaan medan listrik. Sebuah mesin khusus digunakan yang berisi larutan penyangga yang menutupi elektroda, sumur untuk gel untuk menahan di dalam dan elektroda itu sendiri.
Gel dalam Elektroforesis Gel
Elektroforesis gel membutuhkan penggunaan gel yang dibentuk menjadi lempengan yang biasanya terbuat dari versi agar-agar yang dimurnikan dari rumput laut yang disebut agarosa.
Gel agarosa membuat matriks berpori di mana molekul bermuatan berbagai ukuran dapat melakukan perjalanan pada kecepatan yang berbeda. Bahan kimia yang disebut etidium bromida (EtBr) ditambahkan ke larutan gel sebelum dituangkan ke dalam cetakan.
Jika Anda memiliki molekul DNA atau protein yang sangat kecil untuk dipisahkan, Anda mungkin perlu menggunakan a gel poliakrilamida sebagai pengganti agarosa. Berhati-hatilah saat menggunakan poliakrilamida, karena bersifat neurotoksik.
Sisir khusus ditempatkan dalam cetakan gel agarosa, dan kemudian dikeluarkan dengan hati-hati setelah mengeras. Di sinilah fragmen DNA atau sampel molekuler lainnya ditempatkan, setelah terlebih dahulu dicampur dengan pewarna khusus. Itu memuat pewarna hanya untuk melacak pergerakan DNA, karena tidak terlihat sebaliknya.
Ada juga sumur yang berisi apa yang disebut tangga DNA atau penanda. Ini berfungsi sebagai templat berkualitas tinggi dengan ukuran pita yang diketahui, untuk perbandingan ukuran dengan sampel DNA yang sedang dipelajari. Setelah medan listrik diterapkan, molekul bermuatan negatif ini akan berjalan melalui gel menuju ujung positif.
Hasil Elektroforesis Gel
Setelah molekul telah melakukan perjalanan ke ujung gel, sekarang saatnya untuk membaca hasil elektroforesis gel. Pewarna EtBr dalam gel mengikat DNA dengan mudah, oleh karena itu penggunaannya, dan kemudian Anda dapat melihat pita DNA berfluoresensi di bawah sinar UV.
Anda harus sangat berhati-hati untuk tidak menyentuh etidium bromida, karena afinitasnya terhadap DNA juga berarti dapat melepaskannya; karena itu dianggap sebagai mutagen. Pewarna yang lebih baru dan lebih aman sekarang tersedia, meskipun titik harganya lebih tinggi.
Sinar UV mengungkapkan intensitas pita elektroforesis gel DNA atau sampel molekuler lainnya. Lokasi pita pada gel mengungkapkan ukuran fragmen DNA. Itu intensitas pita elektroforesis gel mengungkapkan konsentrasi molekul.
Sekarang Anda dapat membandingkan pita DNA dalam sampel Anda dengan sampel tangga DNA. Ukuran pita tangga yang diketahui akan membantu Anda menentukan ukuran relatif DNA yang Anda pelajari.
Pentingnya Elektroforesis Gel Berkualitas
Elektroforesis gel telah digunakan dalam Sidik jari DNA dan forensik. Ini telah membantu para peneliti menentukan informasi tentang genom banyak spesies. Menggunakan hasil elektroforesis gel berkualitas tinggi sangat penting untuk bidang-bidang penting ini.
Oleh karena itu, sangat penting untuk bekerja dengan bahan-bahan berkualitas tinggi dan sangat berhati-hati dalam membuat gel. Sangat penting untuk mencegah kontaminasi sampel DNA dengan RNA atau protein.
Pastikan untuk menggunakan buffer bersih, tuangkan gel dengan hati-hati sehingga lubang sisirnya terbentuk secara merata dan simpan semua reagen pada suhu yang tepat. Elektroforesis gel intensitas pita harus cerah dan bersih, tanpa jejak DNA lain di latar belakang, dan tidak ada noda RNA atau protein yang mencemari gel.