DNA
Asam deoksiribonukleat dan protein. DNA diatur ke dalam unit yang disebut gen, yang masing-masing mengkode RNA atau urutan protein tertentu. Gen dipelajari untuk mempelajari tentang struktur dan fungsi biologis, evolusi, penyakit, dan banyak aspek lain dari sistem kehidupan. Untuk mempelajari gen secara rinci, DNA harus diisolasi dan dimurnikan dari sel-sel yang diinginkan.
Ekstraksi DNA
Meskipun DNA dari satu sel dapat diekstraksi dan dipelajari, itu tidak cukup untuk dilihat dengan mata telanjang. Untuk mendapatkan jumlah yang cukup untuk spooling, semakin banyak sel yang harus Anda kerjakan semakin baik (jutaan).
Protokol yang tepat sangat bervariasi untuk menjelaskan karakteristik unik dari sampel tertentu, tetapi langkah-langkah umumnya adalah homogenisasi, lisis, pencernaan, pemisahan dan pengumpulan. Prosedur ini paling baik dilakukan dalam gelas atau tabung plastik kecil (tergantung ukuran sampel).
Sampel umumnya dicampur atau digiling untuk memisahkan sel satu sama lain secara menyeluruh. Hal ini membuat bahan sel lebih mudah diakses oleh reagen berikutnya. Deterjen atau enzim kemudian ditambahkan ke homogenat untuk melisiskan membran sel (dan membran inti jika selnya eukariotik) untuk membebaskan DNA. Pada titik ini, DNA dikelilingi oleh protein, lipid, karbohidrat, segala sesuatu yang terkandung dalam sel.
Pencernaan enzimatik lebih lanjut mungkin diperlukan untuk memecah protein sehingga mereka tidak mengikat DNA dan mengganggu pengumpulannya. DNA dipisahkan dari sisa isi sel dengan menambahkan alkohol dingin, murni, etil atau isopropil. DNA tidak larut dalam alkohol ini sehingga akan mengembun untuk mencoba meminimalkan kontaknya dengan alkohol. DNA yang terkondensasi kemudian dikumpulkan, biasanya dengan sentrifugasi atau spooling.
Penggulungan DNA
Pengumpulan DNA dengan spooling efektif bila sejumlah besar DNA diperoleh dari prosedur ekstraksi. Ini juga merupakan metode demonstrasi yang sangat baik karena jalinan DNA murni yang mengesankan terlihat jelas.
Untuk menggulung DNA langkah pemisahan harus dilakukan dengan hati-hati. Jika itu bukan bagian dari campuran reagen lisis yang sebelumnya ditambahkan, larutan garam pekat (natrium klorida) harus ditambahkan ke larutan sebelum langkah penambahan alkohol. Alkohol dingin perlahan-lahan dituangkan ke sisi tabung reaksi untuk membentuk lapisan di atas larutan berair, menghindari pencampuran. Jika dilakukan dengan benar, alkohol akan membentuk lapisan sendiri di atas lapisan asin. Kemudian datang spooling.
Untuk mengumpulkan DNA dari lapisan asin, tempatkan batang pengaduk kaca dengan hati-hati melalui lapisan alkohol sampai menyentuh bagian bawah tabung. Perlahan putar batang di antara jari-jari, sambil memperhatikan antarmuka antara dua lapisan. Jika ada cukup DNA, DNA akan menggumpal pada antarmuka antar lapisan untuk membentuk massa tembus pandang seperti susu. Putar batang untuk membungkus DNA di sekitarnya (yaitu bagian penggulungan) dan tarik keluar dari tabung. DNA dapat ditransfer ke tabung lain dari alkohol murni untuk penyimpanan atau analisis lebih lanjut.