Menghitung titer virus adalah cara yang rumit untuk mengatakan bahwa seorang ilmuwan menghitung jumlah virus dalam sampel tertentu. Untuk menghitung titer virus, para ilmuwan menginfeksi lempeng bakteri yang sedang tumbuh dengan larutan virus pada berbagai konsentrasi dan cari tahu jumlah virus dalam larutan asli dengan menghitung bakteri yang telah mati karena virus infeksi.
Kenakan sarung tangan, isi 10 tabung kultur dengan 9 ml kaldu dan beri label "10^-1", "10^-2", "10^-3", dan begitu seterusnya sampai “10^-10.” Tabung ini akan digunakan untuk pengenceran serial virus yang digunakan untuk menghitung fag calculate titer. Karena virus dapat tumbuh hingga konsentrasi yang sangat tinggi, Anda perlu mengencerkannya untuk menghitungnya secara efektif. Setiap tabung mewakili pengenceran virus sepuluh kali lipat.
Ambil 1 ml kultur campuran dari tabung berlabel “10^-1” dan pindahkan dengan pipet baru ke tabung berikutnya, berlabel “10^-2”. Campur tabung ini juga.
Lanjutkan pola ini untuk membuat seri pengenceran serial. Anda akan mendapatkan 9 tabung 9 ml dan 1 tabung 10 ml. Viral load di tabung Anda akan diencerkan mulai dari 10 kali (tabung pertama Anda) atau 100 kali (tabung kedua Anda) hingga sepuluh miliar kali (tabung terakhir Anda).
Tambahkan dua tetes kultur bakteri ke agar-agar Anda dan aduk perlahan. Ini adalah bakteri yang akan dibunuh, memungkinkan Anda menghitung jumlah partikel virus dalam larutan tertentu.
Tambahkan 1 ml setiap pengenceran serial ke tabung agar yang sesuai saat tabung masih dalam penangas air panas. Misalnya, 1 ml pengenceran serial 10^-1 Anda harus dimasukkan ke dalam tabung agar berlabel “10^-1.”
Campur masing-masing tabung kemudian tuangkan masing-masing tabung ke dalam cawan petri dengan label yang sesuai. Ini akan membuat lapisan tipis agar yang telah diinokulasi dengan bakteri dan virus di setiap piring. Biarkan piring tumbuh semalaman di inkubator.
Keluarkan piring Anda dari inkubator dan periksa. Anda akan melihat area berawan di seluruh lempeng tempat bakteri tumbuh, kecuali bintik kecil yang jelas yang disebut plak. Plak ini adalah tambalan bakteri mati, dan setiap plak mewakili satu virus.
Ambil jumlah plakat di piring Anda dan kalikan dengan 10. Jika Anda menghitung 157 plak, Anda akan mendapatkan 1570.
Kalikan angka yang Anda peroleh pada langkah sebelumnya dengan kebalikan angka pada tabung pengenceran Anda. Misalnya, jika pelat yang Anda pilih adalah pelat 10^-5, Anda akan mengalikan 1570 dengan 10^5 untuk mendapatkan 157000000. Angka terakhir ini adalah titer fag Anda, dan mewakili jumlah virus per ml kultur asli Anda.