Para ilmuwan dan peneliti mempelajari pertumbuhan bakteri dengan menyiapkan biakan di laboratorium. Cawan petri yang mengandung agar nutrisi menumbuhkan kultur bakteri dari satu sapuan atau inokulasi. Siswa dapat menyiapkan agar nutrisi di rumah menggunakan persediaan dari toko kelontong atau toko makanan kesehatan untuk proyek pameran sains. Peralatan dapur konvensional dan peralatan dapur dasar menyediakan alat untuk menyiapkan media kultur steril yang dapat dituangkan ke dalam cawan petri. Mengikuti teknik steril dengan memanaskan bahan dan menjaga permukaan tetap bersih dan kering akan meningkatkan hasil dengan mencegah jamur dan partikel mengkontaminasi kultur.
Tempatkan saringan kopi di saringan dan gantung saringan di atas bukaan mangkuk bening.
Tuang kaldu perlahan ke dalam saringan, pastikan kaldu tidak meluap dari sisi saringan. Jika filter tersumbat oleh partikel, lepaskan filter bekas, ganti dengan filter bersih dan lanjutkan menuangkan kaldu.
Lepaskan saringan dan saring dari bagian atas mangkuk dan amati apakah kaldu tampak jernih (yaitu, tidak ada partikel tersuspensi dalam cairan). Jika partikel mengambang dalam cairan, ulangi Langkah 1 dan 2 menggunakan mangkuk bening kedua dan filter kopi segar.
Tempatkan panci di atas kompor dan tuangkan kaldu bening ke dalam panci.
Tambahkan 16 ons air suling ke panci berisi kaldu.
Nyalakan kompor dan sesuaikan panas ke sedang-rendah. Panaskan kaldu hingga mendidih (yaitu, gelembung kecil muncul di dekat sisi panci).
Tambahkan 1 sendok teh bubuk agar-agar ke dalam kaldu mendidih (sekitar 2,5 gram) dan aduk campuran sampai bubuk larut. Pastikan untuk mengaduk bubuk agar larut dan mencegah agar-agar tidak tenggelam ke dasar panci (tempat yang bisa terbakar).
Ulangi Langkah 7 sampai semua bubuk agar-agar larut dalam kaldu.
Lanjutkan mengaduk kaldu selama sekitar 1 menit untuk memastikan bahwa semua bubuk benar-benar larut.
Matikan kompor, tutup panci dan biarkan cairan mendingin setidaknya selama 15 menit.
Atur cawan petri steril dalam satu baris agar mudah dipasang, tetapi jangan lepaskan tutupnya. Jika diinginkan, letakkan tatakan kaki tiga untuk menahan panci hangat. Jika Anda menggunakan cangkir custard bertutup sebagai pengganti cawan petri, sterilkan cangkir custard dengan menempatkan cangkir dan tutupnya terbalik (terbalik) di atas loyang yang dilapisi kertas timah dan panggang dalam oven selama setidaknya satu jam pada suhu 375 derajat Fahrenheit. Pastikan cangkir dan tutup yang disterilkan benar-benar dingin sebelum digunakan.
Sentuh bagian luar pot dengan hati-hati untuk memeriksa apakah sudah hangat saat disentuh dan letakkan pot di atas tatakan kaki tiga. Jika panci terlalu panas untuk disentuh, tunggu setidaknya 10 menit agar panci dingin.
Lepaskan tutupnya dan sisihkan. Tempatkan sendok di dalam panci.
Lepaskan tutup dari satu cawan petri dan keluarkan kaldu nutrisi untuk mengisi cawan setengah. Tutup piring segera dengan penutupnya.
Ulangi Langkah 14 untuk masing-masing cawan petri.
Biarkan kaldu nutrisi memadat dalam cawan petri setidaknya selama 1 jam, tanpa gangguan.
Kocok perlahan cawan petri dari sisi ke sisi untuk memeriksa apakah kaldu nutrisi telah benar-benar padat. Jika kaldu tidak benar-benar gel, tunggu 20 menit lagi sebelum memeriksanya lagi.
Tutupi meja atau permukaan datar dengan gulungan tisu untuk menciptakan area kerja yang steril. Sobek selembar handuk kertas dan lipat empat kali untuk membuat gumpalan persegi panjang yang tebal. Atur gumpalan ini di salah satu ujung area kerja.
Pindahkan satu cawan petri ke area kerja steril dan buka tutupnya. Balikkan piring dengan hati-hati dan letakkan salah satu ujungnya di sisi gumpalan yang terlipat, sehingga terletak terbalik dan sedikit miring (dengan sedikit celah pada gumpalan handuk kertas).
Balikkan tutupnya dan letakkan di atas cawan petri pada permukaan kerja yang steril. Jika tetesan air muncul di tutupnya, kibaskan perlahan kelembapan ini sebelum meletakkannya di permukaan yang tertutup, tapi jangan menyentuh bagian dalam tutupnya.
Ulangi Langkah 19 dan 20 untuk setiap cawan petri, posisikan satu sisi cawan terbalik di sisi cawan sebelumnya daripada gumpalan handuk kertas. Piring akan muncul sebagai satu set terhuyung-huyung, dengan celah di satu sisi sehingga kelembaban berlebih bisa menguap.
Lihatlah cawan petri terbalik untuk memeriksa apakah uap air di sisi piring menguap. Setelah semua kelembapan hilang, balikkan pelat ke kanan dan segera tutup dengan penutup untuk digunakan.
Inokulasi agar nutrien pada cawan dengan menyeka swab yang berisi biakan yang diinginkan pada permukaan agar nutrien sebelum ditutup dengan tutupnya. Balikkan cawan petri sehingga padatan berada di atas. Simpan cawan petri yang telah diinokulasi dengan padatan di atasnya untuk pembiakan dan tutupnya di bawah untuk menangkap kelembaban, partikel lepas atau pertumbuhan.
Hal yang Anda Butuhkan
- Filter kopi
- Saringan
- 2 mangkuk besar dan bening
- 16 ons. kaldu sapi bebas lemak fat
- 16 ons. air sulingan
- Panci masak dengan penutup
- Kompor
- 10 gram agar-agar
- sendok takar
- Pengaduk
- Gulungan handuk kertas
- pemegang pot
- Sendok logam
- Cawan petri steril atau cangkir custard bening dengan penutup
- Opsional: pengatur waktu, tatakan kaki tiga, oven, panci, aluminium foil, panci
Tips
Jika kelembaban berlebihan muncul pada tutupnya, keringkan dan sterilkan tutupnya dalam oven yang disetel pada suhu 375 derajat Fahrenheit selama setidaknya 1 jam (pastikan untuk meletakkan tutupnya dalam panci bersih yang dilapisi dengan aluminium foil sebelum meletakkannya di oven).
Peringatan
-
Berhati-hatilah saat memegang panci panas untuk menghindari luka bakar. Jika sisi panci terlalu panas, cairan dalam panci sangat panas. Kaldu nutrisi harus hangat untuk dituangkan ke dalam cawan, tetapi tidak terlalu panas untuk menghasilkan kondensasi yang berlebihan di cawan petri selama pendinginan dan pengaturan.
Jangan menyentuh bagian dalam cawan petri (yaitu piring atau tutup) untuk menghindari masuknya bakteri yang tidak diinginkan ke dalam kultur.